[發明專利]一種硅藻顯微觀察的方法

無效

• 申請號: 201310643497.4
• 申請日: 2013-12-03
• 公開（公告）號: CN103674980A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發明（設計）人: 尤慶敏;王全喜;劉琪;倪依晨
• 申請（專利權）人: 上海師范大學
• 主分類號: G01N23/22
• 分類號: G01N23/22;G01N21/84
• 代理公司: 上海申新律師事務所 31272
• 代理人: 竺路玲

技術領域

本發明涉及生物科學實驗技術領域，具體講就是涉及植物標本的顯微觀察，尤其是涉及一種硅藻顯微觀察的方法。

背景技術

硅藻是一類真核藻類，種類多，數量大，而且分布廣泛。硅藻是海洋和淡水中主要的初級生產力，在全球碳循環和硅循環中具重要作用，同時越來越多的應用在水環境監測、古生態重建和地層關系上。硅藻細胞具有高度硅質化的細胞壁。由上、下兩殼套合而成，殼面具有兩側對稱或輻射對稱的花紋。硅藻種類的鑒定主要是以硅藻殼的形態及殼表面上的花紋為依據。為了能看清楚硅藻殼上的花紋，在顯微觀察之前，標本必須先經過消解處理，將其內含物（主要是有機質）除去。

目前傳統的硅藻顯微觀察方法包括用永久封片在光鏡下觀察和取消解后的樣品在掃描電鏡下觀察兩個步驟。硅藻標本經消解后，保存在無水酒精中，搖勻，吸取20ml標本放置在蓋玻片上，烘干后用封片膠封入載玻片中，待充分風干后即成為永久封片，可用于光鏡觀察。但是硅藻標本一旦制成永久封片后，封片中的硅藻標本就不能用于掃描電鏡觀察。當采取掃描電鏡觀察時，先剪取一塊與銅臺大小一致的導電膠粘在銅臺上，吸取保存于無水酒精中的標本10-15ml滴在粘有導電膠的銅臺上，該步驟中標本沒有經過光鏡檢查，因此不能確認標本中是否有需要的種類，特別是稀有硅藻，在樣品中的數量很少，很難保證每一滴樣品中都能有。待銅臺上的樣品徹底風干，一般1天左右，或是放置于烘干箱中20分鐘。噴金，放入掃描電鏡中觀察，硅藻種類的體積比較小，一般長度10-100μm，電鏡下觀察一個銅臺需要2小時左右，如果標本未經光鏡檢查，掃描電鏡觀察時經常會找不到需要的種類，這樣既浪費時間精力，又浪費能源。目前的硅藻標本經掃描電鏡觀察后就會清洗掉，如果標本中有稀有硅藻，將是對標本的極大浪費。

發明內容

本發明的技術問題目的是針對現有的硅藻標本在經過掃描電鏡觀察后無法用于光鏡觀察的技術缺陷，提供一種硅藻顯微觀察的方法，硅藻標本在經過掃描電鏡觀察后仍可以進行光鏡觀察，并能獲得殼面清晰紋飾，該方法尤其適用于數量少且珍稀的硅藻種類，能夠提高標本的利用率，縮短試驗周期，節省使用掃描電鏡的高額成本。

技術方案

為了實現上述技術目的，本發明設計一種硅藻顯微觀察的方法，其特征在于，它包括以下幾個步驟：

(1)硅藻標本放在低倍光鏡下鏡檢，即將經消解處理的標本取出放在玻片上，在低倍鏡下觀察；

(2)硅藻標本在掃描電鏡下觀察，即將經過光鏡檢查過的標本粘在銅臺上，經噴金，放入掃描電鏡中觀察拍照；

(3)硅藻標本在高倍光鏡下觀察，即將掃描電鏡觀察過的標本從銅臺上取下，制成永久封片后，在高倍鏡下觀察拍照。

進一步，在所述步驟(1)硅藻標本放在低倍光鏡下鏡檢時，將所述消解處理后的標本取出，取出時需要將樣品在振蕩器上充分振蕩后，用移液槍吸取20～30ml，同時準備好干凈的載玻片，載玻片上放置與銅臺尺寸一致的圓形蓋玻片數張，一般6～8片，均勻排列在載玻片上，并在旁邊用記號筆編號。將取出的標本依次滴入圓形蓋片上，靜置2分鐘，放在20倍或40倍光鏡下檢查，將標本中有需要種類的蓋片編號記錄下來。

進一步，在所述步驟(2)硅藻標本掃描電鏡下觀察時，在銅臺上貼1～2條細條狀導電膠，將記錄好編號的圓形蓋片小心放在干凈的銅臺上，待充分風干，或是放置于烘干箱中20分鐘，噴金，放入掃描電鏡中觀察，查找所需要的種類并拍照，記錄每個銅臺上的種類數量和位置。

進一步，在所述步驟(3)硅藻標本高倍光鏡下觀察時，先將電鏡觀察后的銅臺取出，用鑷子將圓形蓋片從銅臺上取下來，用封片膠將蓋片有標本的一面封到載玻片上，待封片膠完全風干，放在100倍光鏡下用滴油觀察，對所需要的種類進行光鏡觀察拍照，此時可參考電鏡觀察時記錄的種類數量和位置。

有益效果

本發明提供的一種硅藻顯微觀察的方法，使硅藻標本在經過掃描電鏡觀察后，仍可以進行光鏡觀察，并能獲得殼面清晰紋飾的方法，該方法特別適用于數量少且珍稀的硅藻種類，提高標本的利用率，同時還能縮短試驗周期，節省使用掃描電鏡的高額成本。

附圖說明

附圖1是本發明的流程步驟示意圖。

具體實施方式

下面結合附圖和實施例，對本發明做進一步說明，

實施例

如附圖1所示，以Neidium?iridis標本的顯微觀察為例，它包括以下幾個步驟：