[發明專利]一種培養瓶及其制備方法及應用

在審

• 申請號: 201310643306.4
• 申請日: 2013-12-03
• 公開（公告）號: CN104673662A
• 公開（公告）日: 2015-06-03
• 發明（設計）人: 謝愛武;李琴
• 申請（專利權）人: 深圳市艾瑞生物科技有限公司
• 主分類號: C12M1/34
• 分類號: C12M1/34;C12M1/24;C12Q1/06
• 代理公司: 北京聯瑞聯豐知識產權代理事務所(普通合伙) 11411
• 代理人: 黃冠華

技術領域

本發明屬于微生物檢測技術領域，特別是指一種培養瓶，本發明還涉及一種培養瓶的制備方法及應用。

背景技術

病原菌能引起多種感染和傳染病，對病原菌進行準確的檢測和鑒定可以為疾病的診斷、治療及流行病調查提供有效的依據。隨著抗菌藥物的大量使用，導致出現大量嚴重耐藥菌株以及新的病原微生物的出現，給臨床診斷和治療帶來了極大的困擾，這也給病原微生物的檢測和診斷提出來更高的要求。對血液樣本進行細菌培養和檢測是診斷血液感染類疾病的必須措施。由微生物侵犯血液引起敗血癥和菌血癥是臨床上的危急病癥，死亡率高達29％。據權威資料統計，近20年來血液感染的發生率明顯增加，已由上世紀70年代的6％上升至21世紀初期的13％，目前仍處于上升趨勢。對于血液感染性疾病患者，能否有效治愈，很大程度上決定于快速、及時、準確的細菌培養檢測報告。過去一直沿用傳統手工培養檢測方法，靜態培養、肉眼觀察，存在微生物生長差、培養時間過長（7天甚至更長）、陽性率檢出低、準確性差、污染率高等缺點，往往延誤冶療，已不能適應現代臨床醫療的需要。

血培養主要通過監測培養基中的渾濁度、pH值、代謝終產物CO₂的濃度、熒光標記底物或代謝產物等的變化，定性地檢測微生物的存在。當前得到應用的血培養方法有以下幾種，一是檢測培養基的導電性和電壓改變：血培養基中因含有不同電解質而具有一定導電性。微生物在生長代謝的過程中可產生質子、電子和各種帶電荷的原子團（例如在液體培養基內CO₂轉變成HCO₃^－），通過電極檢測培養基的導電性或電壓可判斷有無微生物生長，這一方法需要采用較精密的電學儀器進行檢測。二是測定培養瓶內壓力變化：許多細菌生長過程中，常伴有吸收或產生氣體現象，如很多需氧菌在胰酶消化大豆肉湯中生長時，由于消耗培養瓶中的氧氣而首先表現為吸收氣體，而厭氧菌生長時最初均無吸收氣體現象，僅表現為產生氣體（主要為CO₂），因此可利用培養瓶內壓力的改變檢測微生物的生長情況，這一方法也需要采用壓力測試設備進行。三是采用光電原理監測培養基pH改變：微生物在代謝過程中必然會產生終代謝產物CO₂，引起培養基pH值及氧化還原電位改變。利用光電比色檢測血培養瓶中某些代謝產物量的改變，可判斷有無微生物生長，這一方法檢測相對復雜。四是采用同源熒光技術來監測微生物的生長：與培養基結合的熒光分子在最初具有一定熒光值，當有微生物存在時，其生長代謝過程中或產生CO₂、或發生pH值改變、或氧化還原使電位改變等，均可導致液體培養基內的熒光分子結構發生改變而成為無熒光的化合物，即發生熒光衰減。通過光電比色計檢測熒光衰減水平，可判斷有無微生物生長，該方法同樣需要采用昂貴的自動檢測儀。

綜上所述的幾種方法，均在檢測方式，或者檢測精度，以及檢測的及時性上等，都存在不少問題，因此亟待提出一種新方法來解決這些問題。

發明內容

本發明的一個目的是提供一種基于熒光和化學傳感膜技術的微生物培養瓶，既可以采用全自動檢測儀進行檢測，也可以通過目測來判斷微生物生長，提高培養速度，靈敏度高、結構簡單等。

本發明的另一個目的是提供一種基于熒光和化學傳感膜技術的微生物培養瓶的制備方法，其制備方法簡單，易于大規模生產。

本發明的另一個目的是提供一種培養瓶的應用。

本發明的技術方案是這樣實現的：

一種培養瓶，包括瓶體、瓶蓋、膠塞；其中，所述瓶體內預分裝有液體培養基，所述液體培養基中混懸有吸附樹脂，所述瓶體內部底端貼敷一層傳感膜，所述傳感膜含有熒光指示劑及化學指示劑，當瓶內微生物的生長繁殖時，不僅能使所述傳感膜發生顏色變化，而且發生熒光改變。

優選的是，所述液體培養基為需氧菌、厭氧菌和真菌培養所需的胰酶大豆肉湯或腦心浸液等培養成分，并添加適當微生物促生長因子，使細菌快速繁殖生長，便于快速檢測。

優選的是，所述吸附樹脂為一種或多種非離子吸附樹脂和弱酸性陽離子樹脂，將所述吸附樹脂混懸于所述液體培養基中，用以快速地吸附檢測樣本中所含有的抗生素，降低抗生素對血培養的負面影響，提高陽性檢出率。

優選的是，所述傳感膜，為高分子半透膜，其只允許分子量為200以下的物質通過，避免非相關物質的干擾。

優選的是，所述化學傳感膜，采用高分子硅橡膠材料制備。