[發明專利]樹脂脫色用于比色法測定α-淀粉酶抑制劑活性的方法

無效

• 申請號: 201310631048.8
• 申請日: 2013-11-29
• 公開（公告）號: CN103630500A
• 公開（公告）日: 2014-03-12
• 發明（設計）人: 龍盛京;許云青;姚丹媚
• 申請（專利權）人: 廣西醫科大學
• 主分類號: G01N21/25
• 分類號: G01N21/25
• 代理公司: 廣西南寧公平專利事務所有限責任公司 45104
• 代理人: 王素娥

1.樹脂脫色用于比色法測定α-淀粉酶抑制劑活性的方法，其特征在于，按以下步驟操作：

1）將提取液顏色較深的植物或藥材紅茶、巴戟天、黃芪或紅景天粉碎后用蒸餾水提取：

稱取紅茶、巴戟天、黃芪或紅景天粉末10.00g，加入100mL蒸餾水于90℃水浴中提取30min，過濾，藥渣加80mL蒸餾水于90℃水浴提取30min，過濾，藥渣加60mL蒸餾水于90℃水浴提取30min，過濾，將三次濾液合并，定容至250mL濃度為每1ml相當于0.04g生藥，取30mL濾液離心，離心條件為4000r/min、10min，取上清液20mL作為上樣液；

2)準確稱取經常規處理、去除表面水分的D101大孔樹脂8.00g，將其裝入2cm*15cm層析柱中，柱體積為13mL，取步驟1）的上樣液通過層析柱，控制流速為3BV/h，把流出液再重復一次通過層析柱，流出液分別用10%、30%、50%、70%、95%乙醇-水溶液梯度洗脫，流速為2BV/h，每個梯度洗脫劑用量40mL約為3BV，收集各梯度洗脫流份；

3)各梯度洗脫流份，用3,5-二硝基水楊酸比色法測定脫色后流份對α-淀粉酶的抑制作用；

植物或藥材紅茶、巴戟天、黃芪或紅景天提取液的色素集中于30%～50%的乙醇梯度流份中，70%～95%流份色素較少，收集70%～95%流份用3,5-二硝基水楊酸比色法測定該流份對α-淀粉酶的抑制活性；

各梯度的洗脫流份在722分光光度計中平行測定A₅₂₀值6次，取平均值，以A₅₂₀值的大小來定量比較脫色的效果。

2.樹脂脫色用于比色法測定α-淀粉酶抑制劑活性的方法，其特征在于，按以下步驟操作：

1)將提取液顏色較深的植物或藥材夏枯草粉碎后用去離子提取：

準確稱取夏枯草粉末10.00g，加入100mL去離子水于93℃水浴中提取30min，過濾，殘渣加80mL去離子水于93℃水浴提取30min，過濾，殘渣加60mL去離子水于93℃水浴提取30min，過濾，將三次濾液合并，定容至250mL濃度為0.04g/mL，取30mL濾液離心，離心條件為4000r/min、15min，取上清液20mL作為上樣液；

2)準確稱取經常規處理、去除樹脂表面水分后8.00g的D101大孔樹脂，將其裝入規格2cm*15cm的層析柱中，柱體積為13mL，取步驟1）的上樣液通過層析柱，控制流速為3BV/h，把流出液再重復一次通過層析柱，流出液分別用10%、30%、50%、70%、95%乙醇-水溶液梯度洗脫，流速2BV/h，每個梯度洗脫劑用量40mL為3BV，收集各梯度洗脫流份；

3)各梯度洗脫流份，用3,5-二硝基水楊酸比色法測定脫色后流份對α-淀粉酶的抑制作用；

植物或藥材夏枯草提取液的色素集中于30%～50%的乙醇梯度流份中，70%～95%流份色素較少，收集70%～95%流份用3,5-二硝基水楊酸比色法測定該流份對α-淀粉酶的抑制活性；

各梯度的洗脫流份在722分光光度計中平行測定A₅₂₀值6次，取平均值，以A₅₂₀值的大小來定量比較脫色的效果。

3.樹脂脫色用于比色法測定α-淀粉酶抑制劑活性的方法，其特征在于，按以下步驟操作：

1)將提取液顏色較深的植物或藥材枇杷葉粉碎后用70%乙醇水提取：

準確稱取枇杷葉藥材粉末10.00g,加入100mL體積濃度為70%乙醇水浴回流提取30min,過濾，殘渣加入80mL70%乙醇水浴回流提取30min，過濾，殘渣加入60mL70%乙醇水浴回流提取30min,過濾，合并三次濾液，于65℃旋蒸濃縮至10mL相當于1g/mL生藥,取1.2mL濃縮液用蒸餾水分散成30mL濃度為0.04g/mL，于超聲溶解15min、4000r/min離心15min，取上清液20mL作為上樣液；

2)準確稱取經常規處理、去除樹脂表面水分后8.00g的D101大孔樹脂，將其裝入規格2cm*15cm的層析柱中，柱體積為13mL，取步驟1）的上樣液通過層析柱，控制流速為3BV/h，把流出液再重復一次通過層析柱，流出液分別用10%、30%、50%、70%、95%乙醇-水溶液梯度洗脫，流速2BV/h，每個梯度洗脫劑用量40mL為3BV，收集各梯度洗脫流份；

3)各梯度洗脫流份，用3,5-二硝基水楊酸比色法測定脫色后流份對α-淀粉酶的抑制作用；

植物或藥材枇杷葉提取液的色素集中于30%～50%的乙醇梯度流份中，70%～95%流份色素較少，收集70%～95%流份用3,5-二硝基水楊酸比色法測定該流份對α-淀粉酶的抑制活性；

各梯度的洗脫流份在722分光光度計中平行測定A₅₂₀值6次，取平均值，以A₅₂₀值的大小來定量比較脫色的效果。