[發明專利]一種活體提取縊蟶DNA的方法

無效

• 申請號: 201310630359.2
• 申請日: 2013-11-29
• 公開（公告）號: CN103602669A
• 公開（公告）日: 2014-02-26
• 發明（設計）人: 李家樂;王劦;牛東紅;沈和定;李多;王澤
• 申請（專利權）人: 上海海洋大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 上海天翔知識產權代理有限公司 31224
• 代理人: 呂伴

1.一種活體提取縊蟶DNA的方法，其特征在于，包括如下步驟：

1）縊蟶出水管組織的剝離：

1.1）把待取組織的縊蟶放入水溫20-30℃的海水培養桶內暫養，并在縊蟶外殼粘上帶號碼的標記；

1.2）需要提取DNA時，將待取組織的縊蟶放置在冰上，麻醉待其出水管伸出后用剪刀剪取縊蟶出水管，長度為0.3-1.0cm，放入相應的第一離心管并記好編號；

2）出水管組織基因組DNA的提?。?/p>

往收集在離心管中的出水管組織中加入DNA提取液，渦旋離心15-30s，加入DNA提取液1/10倍體積的l20mg/ml蛋白酶K，震蕩混勻，在56℃放置，直至組織完全溶解得到第一溶液；

3）向第一溶液中加入DNA提取液1.0-1.2倍體積的苯酚溶液翻轉使其充分混勻的第二溶液；將所得的第二溶液放入離心機以10000-12000rpm離心10-20min得到第一上清液，將第一上清液轉移到第二離心管；

4）加入等體積的氯仿/異丙醇混合溶液，充分混勻后放入離心機10000-12000rpm離心10-20min得到第二上清液；所述氯仿/異丙醇混合溶液中氯仿與異丙醇的體積比為24:1；之后向第二上清液中加入兩倍體積的-20℃無水乙醇；以10000-12000rpm離心10-20min后用75%乙醇洗滌2次，倒掉離心管中液體，室溫晾干得到晾干物；加入40-120μl無菌水，4℃冰箱內過夜溶解。

5)提取DNA的檢測：

用1.0%的瓊脂糖凝膠檢測DNA片段大小，DNA大分子條帶清晰。

分光光度計顯示所得DNA的濃度在50-3000ng/μl，OD260/OD280在1.7-1.9。

2.如權利要求1所述的活體提取縊蟶DNA的方法，其特征在于，所述步驟1）的海水培養桶是指圓形塑料桶，內加比重為1.015的海水，底下鋪泥，泥的顆粒直徑Φ<150μm，厚度5-10cm。