[發(fā)明專利]一種基因工程菌發(fā)酵提取海藻液肥料增效劑的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310616623.7
• 申請日: 2013-11-29
• 公開（公告）號: CN103833461A
• 公開（公告）日: 2014-06-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王愛云;陳吉強;劉云
• 申請（專利權(quán)）人: 山東潤銀生物化工股份有限公司
• 主分類號: C05G3/00
• 分類號: C05G3/00;C12N15/70
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種基因工程菌發(fā)酵提取海藻液肥料增效劑的方法,其特征在于該方法的步驟如下：

基因工程菌的構(gòu)建：選擇對海藻發(fā)酵能降解海藻大分子為小分子的光合菌、乳酸菌為供體，提取其細(xì)胞中的遺傳基因組DNA，選擇酵母菌提取其細(xì)胞質(zhì)作為載體，連接重組質(zhì)粒DNA基因組，選擇大腸桿菌為宿主受體，將重組質(zhì)粒DNA基因植入大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)，構(gòu)建出基因工程菌；

基因工程菌的培育篩選：將構(gòu)建的基因工程菌細(xì)胞植入培養(yǎng)基內(nèi)進行培養(yǎng)，每培養(yǎng)12h后篩選出生長態(tài)勢好的菌株繼續(xù)培養(yǎng)，如此培育篩選五代，篩選出的優(yōu)良菌種；

三級種子培養(yǎng)：篩選出的優(yōu)良菌株在培養(yǎng)基培養(yǎng)后，移種到搖床培養(yǎng)8小時移種到200L一級種子罐培養(yǎng)10h，再移種到1000L二級種子罐培養(yǎng)12h；

兩級擴大發(fā)酵：由1000L種子罐移種到10t發(fā)酵罐發(fā)酵16小時，將10t罐發(fā)酵液移植到20t發(fā)酵罐采用流加補料連續(xù)發(fā)酵30h；

微濾膜濾除固體雜質(zhì)：將發(fā)酵液用泵打入微濾膜分離器濾除固體雜質(zhì)；

超濾膜濾除菌絲：除去固體雜質(zhì)的發(fā)酵液用泵打入超濾膜濾除菌絲；

離子交換除鹽：將濾除菌絲的濾清液用泵打入離子交換器除鹽；

負(fù)壓蒸發(fā)濃縮：除鹽后的海藻液進行負(fù)壓蒸發(fā)濃縮得到海藻液。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種基因工程菌發(fā)酵提取海藻液肥料增效劑的方法，其特征在于：三級種子培養(yǎng)中培養(yǎng)基的配制：純凈水800g/L、蛋白胨2.6g/L、酵母粉2g/L、KH₂PO₃?2g/L、K₂HPO₃?1g/L、ZnSO₄·8H₂O?0.5g/L、MgSO₄?2g/L。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種基因工程菌發(fā)酵提取海藻液肥料增效劑的方法，其特征在于：兩級擴大發(fā)酵中發(fā)酵液配方為：海藻粉200目25質(zhì)量份，葡萄糖5質(zhì)量份，無機鹽1質(zhì)量份，豆質(zhì)蛋白2質(zhì)量份，水77質(zhì)量份，發(fā)酵溫度45℃，PH值為6，溶氧比：1:4。