[發明專利]一種快速鑒定月季對白粉病抗性的方法

無效

• 申請號: 201310615202.2
• 申請日: 2013-11-28
• 公開（公告）號: CN103621332A
• 公開（公告）日: 2014-03-12
• 發明（設計）人: 邱顯欽;紀程;晏慧君;陳敏;張婷;周寧寧;李淑斌;蹇洪英;王其剛;張顥;唐開學
• 申請（專利權）人: 云南省農業科學院花卉研究所
• 主分類號: A01G7/00
• 分類號: A01G7/00
• 代理公司: 昆明正原專利商標代理有限公司 53100
• 代理人: 徐玲菊

技術領域

本發明屬于植物抗病性鑒定技術領域，具體涉及月季白粉病離體抗性資源的方法。

背景技術

月季（Rosa?hybrida）是薔薇科（Rosaceae）薔薇屬（Rosa）植物，目前已成為世界上最流行的庭園植物，也是重要的盆花及第一大切花。由白粉病菌（Podosphera?pannosa,?Pp）引起的白粉病害（Powdery?mildew）則是全國乃至全球切花月季生產的第一大病害。

目前，生產中主要通過反復施用化學藥劑來預防和控制其發生，這樣不僅增加了生產成本，同時還造成了環境的污染和破壞。因此，不論從節能環保的方向考慮，還是從縮短育種周期等方向考慮，從現有的月季種質資源中發掘白粉病抗性性狀及其相關基因并應用到現代月季的新品種選育中，從而培育具有白粉病抗性的月季新品種是今后月季遺傳育種的主要方向之一。而白粉病抗性新品種選育的基礎就是抗性資源的準確鑒定。目前，報道的月季白粉病抗性鑒定技術以葉片侵染觀察法為主，該鑒定方法的不足之處有：鑒定周期過長、結果準確性不高、操作繁瑣等。

發明內容

為克服現有技術中“葉片侵染觀察法”對月季白粉病抗性鑒定存在鑒定周期過長、肉眼觀察不準確、結果易受環境條件影響等不足，本發明提供一種準確、簡單、快捷篩選月季抗白粉病資源的方法，為下一步的雜交育種親本抗性鑒定、雜交后代抗性快速鑒定等提供技術支撐。

本發明通過以下技術方案實現：一種快速鑒定月季對白粉病抗性的方法，其特征在于經過下列各步驟：

（1）以新鮮、健康、完整的月季嫩葉作為侵染材料，用紙袋將嫩葉套袋隔離兩周；

（2）將新采集的月季白粉病菌孢子放入滅菌蒸餾水中，調配成孢子含量數為1×10⁴~1×10⁵/ml的分生孢子懸浮液；

（3）取步驟（1）的月季嫩葉洗凈并吸干表面水份，在每片嫩葉反面以滴液的方式，接種步驟（2）的分生孢子懸浮液20uL后，置于以滅菌蒸餾水為培養介質的培養皿中，封口后在溫度為20～25℃、光照強度為2000～3000lx、光照時間為15～16h/d的條件下培養48~72h；

（4）將步驟（3）培養后的嫩葉浸泡在三氯乙酸質量含量為0.10~0.15%的乙醇脫色液中，于37℃下恒溫脫色36～48h，期間更換2～3次新的上述乙醇脫色液，直至嫩葉完全透明，再用考馬斯亮藍染色液進行染色6~10min，然后用蒸餾水漂洗，最后滴加甘油∶水=1∶1體積比的溶液進行制片；

（5）將步驟（4）的制片置于光學顯微鏡下，觀察并以病情指數統計嫩葉上的白粉菌感染情況，即得到該月季嫩葉對白粉病的抗性。

所述步驟（4）的考馬斯亮藍染色液是質量濃度為0.10~0.15%的三氯乙酸水溶液∶質量濃度為0.50~0.70%的考馬斯亮藍R-250甲醇溶液的體積比=1∶1。

所述步驟（5）的病情指數是：

0級為免疫，即無菌絲、無菌落；

1級為高抗，即菌絲長小于100um，無菌落；

2級為中抗，即菌落直徑小于400um；

3級為中感，即菌落直徑小于800um；

4級為易感，即菌落直徑大于1mm。

與現有技術相比，本發明具備以下優點和顯著效果：

（1）目前已報道的月季白粉病抗性鑒定方法，是以肉眼觀測為鑒定依據，其鑒定結果重復性不好且準確率低，而本發明的“離體葉片顯微觀察法”是在月季葉片受白粉病菌侵染后，在人工控制的穩定條件下培養一定時間，以白粉菌顯微形態觀測為鑒定標準進行的。該鑒定方法可為月季白粉病抗病育種工作準確篩選出抗性的月季資源。

（2）目前，月季白粉病抗性鑒定從菌種的收集、侵染、發病、統計到鑒定結果至少需要14～21天，是一項周期性較長的工作。本發明采用分生孢子懸浮滴液、離體葉片營養補充，于一定的條件下培養48h后就能準確、快速鑒別出月季資源不同基因型的白粉病抗性情況，明顯縮短了鑒定周期。

（3）目前，月季白粉病抗性鑒定有室內和室外鑒定法，室外鑒定法需要對鑒定材料進行扦插繁殖，還需統計一定量的樣本重復數才能提高實驗結果的重復性。本發明采用葉片離體鑒定法，操作簡單、鑒定快速、實驗結果準確。可用于月季雜交育種后代種子的苗期快速抗性鑒定，為月季抗性育種后期抗性資源的篩選提供簡單、快速、準確的鑒定方法。

附圖說明

圖1為日本無刺野薔薇葉片經白粉菌侵染48h后白粉菌與寄主互作顯微結構圖；