[發明專利]一種納米顆粒的制備方法

有效

• 申請號: 201310613693.7
• 申請日: 2012-05-23
• 公開（公告）號: CN103656679A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發明（設計）人: 袁偉恩;金拓;吳飛;葛雪梅
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61K47/34;A61K9/14
• 代理公司: 上海漢聲知識產權代理有限公司 31236
• 代理人: 胡晶

本申請是申請號為201210163285.1、發明創造名稱為“一種嵌段高分子及其合成方法和納米顆粒的制備方法”、申請日為2012年5月23日的中國發明專利申請的分案申請。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別涉及一種嵌段高分子及其合成方法和納米顆粒的制備方法。

背景技術

siRNA是一段21－25個堿基對的RNA分子，發現于單細胞生物抵御病毒侵襲的機制。單細胞生物針對入侵病毒的mRNA序列合成出一段與之互補的siRNA，主動結合mRNA，從而阻斷病毒的復制。這種與病原體基因一一對應的干擾策略如果用來開發治療人類疾病的藥物，將從根本上改變目前傳統的新藥發現模式，帶來藥物治療技術的革命。siRNA因其獨特的靶點特異性、結構可設計性和代謝安全性，成為科學界普遍看好的下一代革命性新藥的第一候選。然而，至目前為止，一個高效的體內輸送載體的缺乏，卻導致siRNA的成藥性受到了限制（Castanotto,D.&Rossi,J.J.The?promises?and?pitfalls?of?RNA-interference-based?therapeutics.Nature?457,426-433(2009).）。而目前用于核酸物質輸送的載體多集中在以下幾類：（1）物理導入：物理導入法是最先應用的基因導入方法，即采用電穿孔或粒子轟擊技術等，將目的基因直接輸送至體內或靶位的方法。這些方法無需使用基因載體，但是轉染效率普遍很低、操作復雜，對組織的損傷也比較大。（2）病毒載體：目前對于病毒載體研究較多的是慢病毒載體、腺病毒載體，病毒載體雖然有較高的體外轉染活性，然而，其免疫原性與易導致突變的缺點為體內輸送帶來了巨大的安全隱患。（3）非病毒載體：非病毒載體的優勢主要在于，在保證預期的轉染活性的條件下，可以大大降低病毒載體所帶來的免疫原性與諸多炎癥反應，其一般為以下幾種載體設計：(a)陽離子脂質體；(b)聚陽離子基因載體。而目前研究更多的主要集中于聚陽離子基因載體與陽離子脂質體的修飾，使之適用于基因物質的靶向輸送。陽離子脂質體具有較高的體內外轉染活性，然而，由于表面的正電荷影響其體內的正常分布，同時，由于選用陽離子脂質，免疫原性與炎癥反應在動物試驗中也成為不可避免的缺點之一（Gao,K.&Huang,L.Nonviral?methods?for?siRNA?delivery.Molecular?pharmaceutics?6,651-658(2008).）。聚陽離子基因載體目前發展已經較為成熟，在諸多文獻中已有詳盡的報道。此外，在基因輸送載體中，較為成功的實例CALANDO?Pharmaceuticals公司采用的RONDEL^TM技術，以與陽離子基因載體連接的環糊精、十二金剛烷為載體材料，以轉鐵蛋白為靶向基團對基因物質進行包裹遞送，以系統給藥治療實體瘤，目前正在臨床I期試驗中。然而,在結構設計中難以保證靶向基團在結構的表面，而環糊精可以減低毒性,但是此結構增多會降低轉染活性,存在一個毒性與轉染活性的自身設計矛盾，同時,其連接難以在體內實現無毒化降解（Davis,M.E.The?first?targeted?delivery?of?siRNA?in?humans?via?a?self-assembling,cyclodextrin?polymer-based?nanoparticle:from?concept?to?clinic.Molecular?pharmaceutics6,659-668(2009).）。

用于治療的核酸藥物載體須以盡可能簡單的結構完成以下五個步驟：A）核酸的凝聚、B）核酸對病變細胞的靶向、C）核酸的內吞逃逸、D）核酸在病變細胞漿的釋放以及E）載體自身的無毒化代謝?，F有技術中，運用人體內源性單體和安全性已知的藥物代謝物構建的pH響應性可降解聚陽離子以及其簡單的結構高效實現了上述步驟中的A、C、D、E。但是面對病變細胞的多樣性（步驟B），其通用性卻大為折扣。Polyplex顆粒表面膜的自組裝是一項尚未妥善解決的難題。中性磷脂沒有吸附于Polyplex表面的化學驅動力。Huang等人1990年代中葉報道的單價負電荷磷脂構建的Lipopolyplex（LPD－II）表面膜的物理穩定性欠佳。其最近報道的兩價負電荷磷脂構建的Lipopolyplex雖然大幅改善了表面膜物理穩定性，外表面過多的負電荷可能影響納米顆粒對于病變細胞的附著。同樣，很多研究提出聚陽離子載體與PEG共價連接可使得聚陽離子基因納米顆粒表面正電荷有效屏蔽，然而，共價連接PEG后，對基因的復合能力卻明顯受到影響。

發明內容