[發明專利]一種利用數字PCR檢測食品中菌落總數的方法無效
| 申請號： | 201310613501.2 | 申請日： | 2013-11-27 |
| 公開（公告）號： | CN103667462A | 公開（公告）日： | 2014-03-26 |
| 發明（設計）人： | 陳愛亮;吳英;蔣小玲;呂珍珍;劉金釧;楊曙明 | 申請（專利權）人： | 中國農業科學院農業質量標準與檢測技術研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245 | 代理人： | 關暢 |
| 地址： | 100081 北*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 利用 數字 pcr 檢測 食品 菌落 總數 方法 | ||
1.數字PCR方法在檢測食品中菌落總數中的應用。
2.一種利用數字PCR檢測食品中菌落總數的方法，包括如下步驟：
（1）富集待測食品中的細菌，將富集物與DNA結合物共同孵育，獲得PCR擴增模板；
所述DNA結合物為不能穿過完整的細胞膜，但能與細胞膜受損后暴露出來的DNA結合的物質；
（2）配制PCR反應體系，進行數字PCR反應；所述PCR反應體系中含有步驟（1）獲得的PCR擴增模板、細菌通用引物對、熒光染料、dNTP和DNA聚合酶；
（3）根據步驟（2）數字PCR反應產生的熒光信號，計算得到所述待測食品中的菌落總數。
3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：所述細菌通用引物對為由序列表中序列1和序列2所示的兩條單鏈DNA分子組成的引物對。
4.根據權利要求2或3所述的方法，其特征在于：所述DNA結合物為疊氮溴化丙錠或疊氮溴化乙錠。
5.根據權利要求2-4中任一所述的方法，其特征在于：所述熒光染料為SybGreen或EvaGreen。
6.根據權利要求2-5中任一所述的方法，其特征在于：步驟（2）中，進行所述數字PCR反應時的退火溫度為58℃。
7.一種利用數字PCR檢測食品中菌落總數的試劑盒，包括如下物質：
（a）引物對；所述引物對為由序列表中序列1和序列2所示的兩條單鏈DNA分子組成的引物對；
（b）DNA結合物；所述DNA結合物為不能穿過完整的細胞膜，但能與細胞膜受損后暴露出來的DNA結合的物質。
8.根據權利要求7所述的試劑盒，其特征在于：所述DNA結合物為疊氮溴化丙錠或疊氮溴化乙錠。
9.根據權利要求7或8所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括熒光染料；
10.根據權利要求9所述的試劑盒，其特征在于：所述熒光染料為SybGreen或EvaGreen。
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