[發明專利]一種基于CRISPR基因敲除技術建立肥胖癥大鼠動物模型的方法

無效

• 申請號: 201310610085.0
• 申請日: 2013-11-27
• 公開（公告）號: CN103614415A
• 公開（公告）日: 2014-03-05
• 發明（設計）人: 林卿;范國平
• 申請（專利權）人: 蘇州同善生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;A01K67/027
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

1.一種基于CRISPR基因敲除技術建立肥胖癥大鼠動物模型的方法，其特征是，包括以下步驟：

(1)建立Lep/Lepr基因敲除大鼠模型；

(2)肥胖癥疾病大鼠動物模型的鑒定及相關分析；

(3)肥胖癥疾病大鼠動物模型的能量代謝與體脂率評價。

2.根據權利要求1所述的一種基于CRISPR基因敲除技術建立肥胖癥大鼠動物模型的方法，其特征是，所述建立Lep/Lepr基因敲除大鼠模型，具體包括以下步驟：

1）CRISPR靶向修飾基因載體的構建；

2）大鼠促排卵和體外受精；

3）大鼠受精卵的顯微注射；

4）受精卵體外培養、植入受體及靶向基因修飾動物的培育。

3.根據權利要求1所述的一種基于CRISPR基因敲除技術建立肥胖癥大鼠動物模型的方法，其特征是，所述肥胖癥疾病大鼠動物模型的鑒定及相關分析，具體包括以下步驟：

1）對CRISPR靶向位點進行DNA測序鑒定大鼠動物模型的基因型；

2）利用實時定量PCR（real-time?PCR）檢測大鼠細胞中Lep/Lepr基因mRNA水平的變化；

3）通過免疫熒光染色檢測大鼠細胞中Lep/Lepr蛋白的缺失；

4）觀察大鼠心臟、肝、脾臟、腎臟、肌肉、視網膜等重要器官或組織是否發生病變；

5）觀察大鼠不同部位脂肪量和肝臟重量是否發生變化。

4.根據權利要求1所述的一種基于CRISPR基因敲除技術建立肥胖癥大鼠動物模型的方法，其特征是，所述肥胖癥疾病大鼠動物模型的能量代謝與體脂率評價，具體包括以下步驟：

1）實驗期間定期觀察大鼠進食量、撒食量、身長、尾長、體重，并計算食物利用率和Lees指數；

2）采用體脂率直接測量法測量體脂率：利用人體組成分析儀和生物電阻抗技術﹙BIA﹚法測定體脂率；

3）采用體脂率間接測量法測量體脂率：利用皮褶厚度計測量受試對象的臂部、肩胛部、腹部、髂部、大腿部5個部位皮褶厚度。

5.根據權利要求4所述的肥胖癥疾病大鼠動物模型的能量代謝與體脂率評價，其特征是，所述食物利用率計算公式為：食物利用率=體重增長量／(喂食量-撒食量)。

6.根據權利要求4所述的肥胖癥疾病大鼠動物模型的能量代謝與體脂率評價，其特征是，所述和Lees指數計算公式為：Lees指數=體重(g)×10³／體長(cm)?。