[發明專利]一種提高體外受精胚胎發育率的方法

有效

• 申請號: 201310608158.2
• 申請日: 2013-11-26
• 公開（公告）號: CN103589682B
• 公開（公告）日: 2018-06-26
• 發明（設計）人: 劉忠華;郇延軍;牟彥雙;孔慶然;朱江;呂明
• 申請（專利權）人: 東北農業大學
• 主分類號: C12N5/075
• 分類號: C12N5/075;C12Q1/02
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 鄧宇

本發明提供了一種提高體外受精胚胎發育率的方法，在確定卵母細胞成熟培養時間范圍的基礎上，檢測成熟卵母細胞中谷胱甘肽含量，將卵母細胞體外成熟培養至谷胱甘肽含量下降前進行體外受精。本發明為今后體外受精胚胎的生產和相關科學研究奠定了基礎。

技術領域

本發明涉及一種提高體外受精胚胎發育率的方法，屬于胚胎工程技術領域。

背景技術

近些年來，體外受精技術得到迅猛發展和廣泛應用，使良種動物的生產從基礎研究邁進產業化，而產業化成功的關鍵就在于體外受精胚胎的發育，目前，體外受精胚胎的發育水平比較低，制約著體外受精胚胎的產業化發展，研究表明，這主要與卵母細胞體外成熟質量相關，因此，得到能促進體外受精胚胎發育的高質量卵母細胞是十分重要的。現已證明，卵母細胞中谷胱甘肽的含量決定了卵母細胞成熟質量，通過添加半胱氨酸在一定程度上提高了谷胱甘肽含量，并進一步促進了體外受精胚胎的發育，但進一步添加并不能夠繼續提高卵母細胞中谷胱甘肽含量，而且谷胱甘肽的含量隨著成熟培養時間的增加而降低。目前，體外受精胚胎的生產多使用完全成熟的卵母細胞，而該階段的卵母細胞谷胱甘肽含量已降低，從而導致體外受精胚胎的發育率較低，不利于體外受精胚胎在良種繁殖中的應用。因此根據谷胱甘肽含量確定成熟的卵母細胞成熟與應用將在體外受精胚胎的生產和科學研究領域中具有實際應用價值。

體外受精技術是指哺乳動物的精子和卵子在體外人工控制的環境中完成受精繼而發育的技術，它是在家畜繁殖領域繼人工授精、胚胎移植技術之后的又一次革命。體外受精技術的迅速發展，使得哺乳動物卵母細胞的成熟、受精以及胚胎的發育可在體外更加直觀的進行研究，并得到了廣泛的應用。2010年，愛德華茲因發明該技術獨享了2010年的諾貝爾生理學獎。但是，成功獲得體外受精的胚胎并不是體外受精技術的最終目的，如何利用體外受精技術加快胚胎產業化進程才是科研人員始終要面對的課題。在畜牧生產領域，通過體外受精技術技術可以挖掘良種動物的繁殖潛力，加快良種的繁殖速度，繼而促進體外受精胚胎產業化的進程。但迄今為止，體外受精胚胎的發育率仍然是亟待解決的問題，這主要與卵母細胞體外成熟質量密切相關。目前，體外受精技術主要采用完全成熟的卵母細胞，即卵母細胞的細胞核和細胞質充分成熟，而這種方法容易導致卵母細胞中谷胱甘肽含量降低，從而導致原核形成比例降低，不利于后期胚胎的發育?，F有技術并不能從根本上實質性的提高體外受精胚胎的發育，這也嚴重困擾著體外受精胚胎的產業化和相關科學研究的發展。

發明內容

本發明提供了一種提高體外受精胚胎發育率的方法，技術方案如下：

1）確定卵母細胞成熟培養時間范圍；

2）檢測成熟卵母細胞中谷胱甘肽含量，將卵母細胞體外成熟培養至谷胱甘肽含量下降前進行體外受精。

進一步地，以豬作為模型，提高豬體外受精胚胎發育率，步驟如下：

1）確定豬卵母細胞成熟培養時間范圍；

2）檢測豬成熟卵母細胞中谷胱甘肽含量，將豬卵母細胞體外成熟培養至谷胱甘肽含量下降前進行體外受精。

豬卵母細胞體外成熟培養時間為：

具體而言，根據豬卵母細胞體外成熟過程中極體排出的比例，確定豬卵母細胞體外成熟培養時間為33-42h，檢測豬成熟卵母細胞中谷胱甘肽含量，確定用于體外受精的卵母細胞成熟培養時間為33-39h，優選時間為33-36h，效果最好時間為33h。

更進一步，一種提高豬體外受精胚胎發育率的方法，具體步驟如下：

1）在豬卵母細胞體外成熟液中培養具有完整的三層以上卵丘細胞的卵母細胞，培養的條件為38.5℃，5%CO₂和飽和濕度的二氧化碳培養箱；

2）通過檢測豬卵母細胞體外成熟過程中極體排放比例，確定豬卵母細胞成熟培養時間為33-42h；