[發明專利]一種降鈣素原乳膠增強免疫比濁法檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201310601388.6
• 申請日: 2013-11-25
• 公開（公告）號: CN103558400A
• 公開（公告）日: 2014-02-05
• 發明（設計）人: 李民友;潘能科;高昂
• 申請（專利權）人: 重慶中元生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/531
• 代理公司: 重慶博凱知識產權代理有限公司 50212
• 代理人: 伍倫辰

技術領域

本發明涉及一種體外診斷試劑領域，尤其是一種降鈣素原膠乳增強免疫比濁法檢測試劑盒。

背景技術

降鈣素原(procalcitonin,PCT)是一種由116個氨基酸組成的糖蛋白，是降鈣素(calcitonin，CT)的前體肽。降鈣素原可被酶裂解為許多小的片斷，最終形成氨基降鈣素原、成熟的降鈣素和鈣抑肽。降鈣素原可以以游離形式存在于正常人血清中。在正常情況下，人體內血清PCT水平很低，大多低于0.1ng/ml，0.5ng/ml是全身性感染（膿毒癥）診斷的分界值；新生兒出生2天內PCT生理性增高，最高可達21ng/ml；長期血液透析患者血漿PCT值可達1.5ng/ml。降鈣素原在感染后2-3h即可增高，?6-12h后到達頂峰，在48h內保持較高水平，2d后降到基線水平。半衰期大約25-30h。PCT在體內外穩定性較好，與常規用于炎癥診斷的指標相比，已被公認為最理想的診斷嚴重細菌感染的指標。它在細菌性感染和非細菌性感染的鑒別，細菌性感染的嚴重程度，嚴重感染或膿毒癥的早期診斷，高危患者（如ICU，器官移植術后或免疫抑制治療的患者）感染性疾病的監測，疾病轉歸的評估，以及指導治療方案的選擇等方面有很高的價值，優于目前常用的其他檢測項目，有很好的應用前景。PCT可廣泛用于ICU病房、血液科、腫瘤科、兒科、早產兒及新生兒監護室、外科、內科、器官移植科、急診科和治療實驗室等。

對于PCT檢測，現有檢測方法主要有定量方法、半定量檢測方法和定性檢測方法，定量檢測方法有雙抗夾心法(ELISA)、免疫發光法、高效液相色譜分析、放射免疫分析法等，其中放射免疫分析法和高效液相色譜分子法在臨床中有一定的限制，而ELISA（雙抗夾心法）和免疫發光法臨床比較常用，ELSA的靈敏度較高，但其操作復雜，需要較多時間，一般結果為定性或半定量，定量時偏差較大，且線性范圍窄，對于樣品稀釋度不好控制；免疫化學發光法具有靈敏度高的優點，可以滿足臨床PCT測定需求，但是需要配套專門儀器使用，價格昂貴不利于醫院推廣，而且標準曲線會隨著時間漂移（發光持續時間長，可在不同時間測量）。定性方法主要有免疫層析法，其可以作為定性或半定量檢測方法，可以快速給出結果，定性時不需要特殊儀器，但是不能給出定量數據，而且主觀誤差較大。

發明內容

針對現有技術存在的上述不足，本發明所要解決的技術問題是：提供一種制備成本低廉，穩定性好，易于保存，數據重復性好，檢測靈敏度高的降鈣素原檢測試劑盒，以及降鈣素原試劑盒的制備方法。

為了解決上述問題，本發明采用了以下的技術方案：

一種降鈣素原乳膠增強免疫比濁法檢測試劑盒，其特征在于，包括試劑R1和試劑R2兩種組分，所述試劑R1主要由緩沖液1、穩定劑1、防腐劑1、EDTA、增凝劑和保護劑1組成；所述試劑R2主要由交聯PCT抗體的聚苯乙烯膠乳微球、緩沖液2、穩定劑2、防腐劑2、保護劑2組成，其中聚苯乙烯膠乳微球與PCT抗體之間以共價交聯方式連接。

本技術方案中的防腐劑1和2是指可以抑制試劑中細菌和微生物污染的一類試劑，對試劑具有防腐殺菌的作用。試劑R2中的保護劑一類能夠保護膠乳顆粒表面的抗體的試劑。穩定劑1和2可以保持試劑內的電荷平衡。

本技術方案中的降鈣素原膠乳增強免疫比濁法檢測試劑盒，將PCT抗體交聯在聚苯乙烯膠乳微球表面，當血液中的PCT與PCT抗體反應時，帶動聚苯乙烯膠乳微球聚集產生一定濁度，而濁度與血液中的PCT含量在一定范圍成正比，可以用全自動生化儀在400-800nm波長下檢測血液中PCT的含量。

作為優化，所述試劑R1中的緩沖液1選自Hepes緩沖液、Tris-HCl緩沖液、MOPS緩沖液、PBS緩沖液、甘氨酸緩沖液、硼砂緩沖液中的一種或幾種，其pH為7.0～9.0，濃度為25～500mmol/L；所述試劑R2中的緩沖液2選自PBS緩沖液、硼砂緩沖液、甘氨酸緩沖液、Hepes緩沖液、GOODS緩沖液、MOPS緩沖液中的一種或幾種，其pH為7.0～9.0，濃度為25～500mmol/L。

作為優化，所述試劑R1中的穩定劑1選自KCl、NaCl、CaCl中的一種或者幾種，其質量濃度為0.5%～10%；所述試劑R2中的穩定劑2采用離子穩定劑和懸浮穩定劑配合使用；其中離子穩定劑為NaCl、KCl、Na₂CO3、Na₂SO4或者K₂SO4，懸浮穩定劑為PEG8000、蔗糖、甘油或者葡萄糖。