[發(fā)明專利]一種基于T細(xì)胞表位篩查低乳糜瀉毒性小麥品種的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310600169.6
• 申請日: 2013-11-25
• 公開（公告）號: CN103675291A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳紅兵;朱曉燕;吳志華;高金燕;袁娟麗;李欣;佟平;楊安樹
• 申請（專利權(quán)）人: 南昌大學(xué)
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;G01N1/28
• 代理公司: 南昌新天下專利商標(biāo)代理有限公司 36115
• 代理人: 施秀瑾

1.一種基于T細(xì)胞表位篩查低乳糜瀉毒性小麥品種的方法，其特征是按如下步驟：

（1）麩質(zhì)蛋白的提取和鑒定

a）麩質(zhì)蛋白的提取：選取各品種小麥仁研缽研磨成細(xì)粉，倒入離心管中，用于提取麩質(zhì)蛋白；第一次抽提，用?50%（v/v）的異丙醇抽提，超聲震蕩10min后，渦旋混勻30min，10000rpm離心10min，收集上清液，保留沉淀；第二次抽提，每管沉淀加入0.5ml?50%異丙醇/1%DTT/50mM?Tris?pH?7.5，超聲震蕩10min，60℃加熱30min，每5-10?min混勻一次，10000rpm?離心10min，收集上清液，棄沉淀，將兩次的上清液合并，14000rpm離心1min，得上清液，即為總的麩質(zhì)蛋白；

b）麩質(zhì)蛋白的鑒定：采用常規(guī)SDS-PAGE電泳，用10%的分離膠和4%的濃縮膠進(jìn)行蛋白分離，用PageBlue^TM對麩質(zhì)蛋白進(jìn)行染色過夜，凝膠成像；

（2）致乳糜瀉T細(xì)胞表位的鑒定

a）按常規(guī)方法將電泳分離的小麥麩質(zhì)蛋白轉(zhuǎn)印到硝酸纖維脂膜上，取出膜，超純水沖洗3次，MemCode^TM?染色試劑盒染色，凝膠成像后脫色；

b）以基于T細(xì)胞表位的Glia-α9單抗和Glia-α20單抗為一抗，按照常規(guī)方法做免疫印跡，BCIP/NBT顯色，Quantity?One軟件分析；

c）通過灰度掃描比較T細(xì)胞表位含量的高低，評估小麥品種乳糜瀉毒性強(qiáng)弱。