[發(fā)明專利]一種核酸適配體及其篩選方法、在檢測前列腺癌細(xì)胞株中的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310590626.8
• 申請日: 2013-11-20
• 公開（公告）號: CN103642810A
• 公開（公告）日: 2014-03-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 高新;上官棣華;羅云;邴濤;王元元
• 申請（專利權(quán)）人: 中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院;中國科學(xué)院化學(xué)研究所
• 主分類號: C12N15/115
• 分類號: C12N15/115;C12N15/10;C12Q1/68;G01N15/14
• 代理公司: 廣州三環(huán)專利代理有限公司 44202
• 代理人: 郝傳鑫

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種核酸適配體及其篩選和應(yīng)用，尤其涉及一種可用于檢測前列腺癌細(xì)胞的核酸適配體及其篩選方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

前列腺癌（prostate?cancer，PCa）是歐美國家男性最常見的惡性腫瘤之一，死亡率僅次于肺癌。近年來,隨著人口老齡化比例的上升和飲食結(jié)構(gòu)的改變,我國PCa的發(fā)病率呈現(xiàn)明顯的上升趨勢,國內(nèi)研究報告顯示上海地區(qū)PCa發(fā)病率已躍居男性泌尿系腫瘤首位。由于前列腺癌起病隱匿，大多數(shù)前列腺癌得到確診時，已經(jīng)是進(jìn)展期或晚期，目前在臨床上對發(fā)展到此階段的前列腺癌采取內(nèi)分泌治療，盡管內(nèi)分泌治療起初對大部分病人有效，但無法完全抑制癌細(xì)胞，病人會最終進(jìn)展為激素非依賴型前列腺癌（hormone-refractory?prostate?cancer，HRPC），并且癌細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)移。但是臨床發(fā)現(xiàn)早期局限性前列腺癌手術(shù)根治效果好，國外文獻(xiàn)報道5年生存率為99％，10年生存率為95％。因此，如果可以早期準(zhǔn)確評估前列腺癌是否發(fā)生轉(zhuǎn)移及侵襲，轉(zhuǎn)移的部位和大小，侵襲的范圍和程度，對于臨床醫(yī)生合理選擇手術(shù)及治療方案有著重大的意義。轉(zhuǎn)移性HRPC治療非常棘手，成為前列腺癌的主要死因。目前就前列腺癌晚期患者而言，治療手段有限，效果較差，其原因在于藥物用量高，毒副作用大，而解決辦法除了開發(fā)新的藥物外，靶向治療成為了最主要的方法。此外，對于前列腺癌根治術(shù)后生化復(fù)發(fā)的病人，目前缺乏有效的靶向診斷措施，難以判斷腫瘤復(fù)發(fā)的部位和位置，使臨床醫(yī)生選擇合理的治療方案非常困難。目前，缺乏高度特異性的靶向介質(zhì)，是制約前列腺癌的靶向診斷和治療發(fā)展的瓶頸。

核酸適配體，是與抗體功能類似的單鏈寡核苷酸分子。可特異性識別包括金屬離子、有機(jī)小分子、多肽、蛋白質(zhì)、細(xì)胞等多種靶標(biāo)，其親和力與抗體相當(dāng)甚至高于抗體。而且。適配體分子小，不攜帶遺傳信息，無免疫原型，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，合成方便且批次差異小等優(yōu)點是抗體無法取代的。因此核酸適配體在生物檢測、疾病的診斷和靶向治療方面具有廣闊的前景。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種具有高度特異性、無免疫原性、分子量小、化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定、易于保存和標(biāo)記的可用于檢測前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C-3的核酸適配體及其衍生物，還相應(yīng)提供所述核酸適配體的篩選方法和應(yīng)用。

為了解決上述技術(shù)問題，一方面，本發(fā)明提供了一種核酸適配體，該核酸適配體的核苷酸序列包含以下序列1、序列2、序列3中任意一條序列所示的DNA片段：

序列1：

5’-ACGCTCGGATGCCACTACAGCTGGTTCGGTTTGGTGACTTCGTTCTTCGTTGTGGTGCTTAGTGGCTCATGGACGTGCTGGTGAC-3’；

序列2：

5’-TGCCACTACAGCTGGTTCGGTTTGGTGACTTCGTTCTTCGTTGTGGTGCTTAGTGGC-3’；

序列3：

5’-TGCCACTAAGCTGGTTCGGTTTGGTGACTTCGTTCTTCGTTGTGGTGCTTAGTGGC-3’。

作為對上述技術(shù)方案的改進(jìn)，可選擇地，上述核酸適配體的核苷酸序列上的某一位置被磷酸化、甲基化、氨基化、巰基化或同位素化。

作為對上述技術(shù)方案的改進(jìn)，可選擇地，前述核酸適配體的核苷酸序列上連接有熒光物質(zhì)、放射性物質(zhì)、治療性物質(zhì)、生物素、地高辛、納米發(fā)光材料或酶標(biāo)記。

以上不論是經(jīng)部分取代或者經(jīng)過修飾后的核苷酸序列，都具有原核酸適配體基本相同或類似的分子結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)和功能，都可用于檢測前列腺癌。

作為一個總的技術(shù)構(gòu)思，本發(fā)明還提供了一種核酸適配體，所述核酸適配體的核苷酸序列包括以下三種序列中的任意一種：

（1）與前述所有技術(shù)方案中所述核酸適配體的核苷酸序列的同源性在60%以上（例如可將前述核酸適配體序列刪除或增加部分互補(bǔ)的核苷酸）；

（2）與前述所有技術(shù)方案中所述核酸適配體的核苷酸序列進(jìn)行雜交的序列；

（3）與前述所有技術(shù)方案中所述核酸適配體的核苷酸序列轉(zhuǎn)錄的RNA序列。

作為一個總的技術(shù)構(gòu)思，本發(fā)明還提供了一種核酸適配體衍生物，所述衍生物是前述所有技術(shù)方案中所述核酸適配體的核苷酸序列的骨架衍生出的硫代磷酸酯骨架，或者是前述所有技術(shù)方案中所述核酸適配體改造成的相應(yīng)肽核酸。

以上不論是衍生出的核酸適配體還是衍生出的其他衍生物，都具有原核酸適配體基本相同或類似的分子結(jié)構(gòu)性質(zhì)和功能，即都可用于檢測前列腺癌。