[發明專利]單克隆抗體MERS?4及其編碼基因和應用

有效

• 申請號: 201310566227.8
• 申請日: 2013-11-14
• 公開（公告）號: CN104628849B
• 公開（公告）日: 2018-04-10
• 發明（設計）人: 張林琦;王新泉;江力瑋;王年爽;史宣玲;左騰
• 申請（專利權）人: 清華大學
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C12N15/13;C12N15/85;C12N5/10;A61K39/42;A61P31/14
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司11245
• 代理人: 關暢

技術領域

本發明涉及一種單克隆抗體MERS-4及其編碼基因和應用。

背景技術

新型冠狀病毒（MERS-CoV）于2012年首次在中東地區被發現感染人類，隨后這種病毒感染引起的疾病又先后出現在歐洲幾個國家和地區。超過半數的感染病人均會出現嚴重的呼吸道疾病，其臨床癥狀同2003年爆發的由SARS-CoV的臨床癥狀非常相似。由于這種疾病可以人傳染給人，引起了全世界的高度關注。到目前為止，還沒有特異性的藥物和疫苗對這種疾病進行治療和預防。

MERS-CoV利用其表面的膜蛋白（S蛋白）進入易感細胞。S蛋白由位于N端的S1結構域和位于近膜端的S2結構域和跨膜結構域組成，其中病毒對細胞易感性是由S1結構域決定的。通過利用MERS-CoV的S1結構域進行共純化實驗，2013年初Raj的研究小組確定了dipeptideyl peptidase4(DPP4，也稱為CD26)為MERS-CoV的受體。

發明內容

本發明的目的是提供一種單克隆抗體MERS-4及其編碼基因和應用。

本發明提供了一種抗體，命名為單克隆抗體MERS-4，由A鏈和B鏈組成；所述A鏈為如下（a）或（b）：（a）由序列表中序列1所示的氨基酸序列組成的蛋白質；（b）將序列1的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由序列1衍生的蛋白質；所述B鏈為如下（c）或（d）：（c）由序列表中序列3所示的氨基酸序列組成的蛋白質；（d）將序列3的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由序列3衍生的蛋白質。

所述A鏈和所述B鏈通過二硫鍵形成單克隆抗體MERS-4。

本發明還保護一種DNA組合物，由編碼所述A鏈的DNA分子甲和編碼所述B鏈的DNA分子乙組成。

所述DNA分子甲可為如下（1）或（2）或（3）的DNA分子：（1）序列表中序列2自5’末端第889-2274位核苷酸所示的DNA分子；（2）在嚴格條件下與（1）限定的DNA序列雜交且編碼所述A鏈的DNA分子；（3）與（1）限定的DNA序列具有90%以上同源性且編碼所述A鏈的DNA分子。上述嚴格條件可為在6×SSC，0.5%SDS的溶液中，在65℃下雜交，然后用2×SSC、0.1%SDS和1×SSC、0.1%SDS各洗膜一次。

所述DNA分子乙為如下（4）或（5）或（6）的DNA分子：（4）序列表中序列4自5’末端第889-1596位核苷酸所示的DNA分子；（5）在嚴格條件下與（4）限定的DNA序列雜交且編碼所述B鏈的DNA分子；（6）與（4）限定的DNA序列具有90%以上同源性且編碼所述B鏈的DNA分子。上述嚴格條件可為在6×SSC，0.5%SDS的溶液中，在65℃下雜交，然后用2×SSC、0.1%SDS和1×SSC、0.1%SDS各洗膜一次。

本發明還保護一種表達盒組合物，由表達所述DNA分子甲的表達盒甲和表達所述DNA分子乙的表達盒乙組成。所述表達盒甲具體可如序列表的序列2所示。所示表達盒乙具體可如序列表的序列4所示。

本發明還保護一種質粒組合物，由重組質粒甲和重組質粒乙組成；所述重組質粒甲為含有所述DNA分子甲或所述表達盒甲的重組質粒；所述重組質粒乙為含有所述DNA分子乙或所述表達盒乙的重組質粒。所述重組質粒甲具體可為含有所述表達盒甲的pMD18-T載體。所述重組質粒乙具體可為含有所述表達盒乙的pMD18-T載體。

本發明還保護將所述重組質粒甲和所述重組質粒乙共轉染哺乳動物細胞得到的重組細胞。所述哺乳動物細胞具體可為293T細胞。

本發明還保護培養所述重組細胞得到的抗體(IgG1抗體）。

本發明還保護一種藥物，其活性成分為所述單克隆抗體MERS-4；所述藥物的功能為如下（Ⅰ）、（Ⅱ）、（Ⅲ）或（Ⅳ）：（Ⅰ）治療和/或預防MERS-CoV感染；（Ⅱ）抑制MERS-CoV增殖；（Ⅲ）抑制MERS-CoV入侵哺乳動物；（Ⅳ）治療和/或預防MERS-CoV引起的疾病。所述“抑制MERS-CoV增殖”具體可為抑制MERS-CoV在哺乳動物細胞中的增殖。所述哺乳動物細胞具體可為Huh7細胞。