[發(fā)明專利]一種脂微球注射液中主藥相分配系數(shù)的測量方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310565887.4
• 申請(qǐng)日: 2013-11-13
• 公開（公告）號(hào): CN103575868B
• 公開（公告）日: 2017-02-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 程櫟;王偉;周麗瑩;魏祥;肖萱;張偉強(qiáng)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京泰德制藥股份有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/15
• 分類號(hào): G01N33/15;G01N33/543
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種脂微球前列地爾注射液中前列地爾主藥相分配系數(shù)的測量方法，具體來講，涉及使用微超濾分離技術(shù)將前列地爾脂微球注射液中油水兩相分離，并通過ELISA法測量水相中的前列地爾含量，從而得到前列地爾脂微球注射液中前列地爾主藥的相分配系數(shù)。

背景技術(shù)

脂質(zhì)體藥物的結(jié)構(gòu)與脂微球類似，通常在脂質(zhì)體研究中均需要測定藥物主成分的包封率，以確保該脂質(zhì)體完全將藥物主成分包封。由于脂質(zhì)體具有磷脂雙分子層，其結(jié)構(gòu)相對(duì)穩(wěn)定，藥物主成分一旦包封于脂質(zhì)體內(nèi)，除非藥物結(jié)構(gòu)遭到破壞，否則很難發(fā)生變化。而脂微球僅具有一個(gè)磷脂分子層，藥物位于脂微球內(nèi)可以自由的在油水兩相之間移動(dòng)，因此包封率這個(gè)定義并不適用于脂微球，通常我們應(yīng)該測量的是藥物主成分在油水兩相中的分配系數(shù)，簡稱為相分配系數(shù)。?

脂微球注射液中含有磷脂包裹的微小油滴組成的脂微球，其平均粒徑在0.2μm左右。前列地爾分布于脂微球中，脂微球由于具有磷脂外殼，因此可以富集于體內(nèi)毛細(xì)血管的血栓位置，從而形成靶向作用。由于脂微球具有靶向作用，前列地爾注射液中前列地爾的含量僅為5μg/ml，在保證藥效的前提下極大降低了藥物的副作用。?

????例如，已市售產(chǎn)品前列地爾注射液由日本科學(xué)家研制成功，并于20世紀(jì)80年代在日本上市。北京泰德制藥股份有限公司從日本成功引進(jìn)了該技術(shù)，并于1995年在國內(nèi)上市。目前前列地爾注射液在國內(nèi)上市十余年，年產(chǎn)量達(dá)到千萬支。?

從公開文獻(xiàn)中可以看出，前列地爾只有位于脂微球內(nèi)，才能有效的起到靶向治療的作用。而由于前列地爾注射液的含量很低，因此雖然前列地爾幾乎不溶于水，經(jīng)過文獻(xiàn)檢索，前列地爾在水中的溶解度為7.5μg/ml，但是這已經(jīng)大于了前列地爾注射液的含量5μg/ml，如果前列地爾較多的溶解并游離于水相中，必然會(huì)影響其藥效，因此測量前列地爾注射液的相分配系數(shù)非常重要。?

根據(jù)以往發(fā)表的文獻(xiàn)，測量脂質(zhì)體包封率主要有過濾，超濾和柱分離三大類方法。物理過濾方法是無法用于脂微球注射液，因?yàn)橹⑶蜃⑸湟簝H具有磷脂分子外殼，不具有脂質(zhì)體的堅(jiān)固結(jié)構(gòu)，容易發(fā)生團(tuán)聚或變形，在物理過濾過程中容易團(tuán)聚堵塞濾膜，如果加壓過濾則容易變形碎裂后通過濾膜。超濾及柱分離可以在不改變脂微球結(jié)構(gòu)的前提下實(shí)現(xiàn)油水兩相的分離，但針對(duì)前列地爾注射液又具有如下問題：1）傳統(tǒng)超濾或柱分析，均需要增加較大量的洗脫液或淋洗液來實(shí)現(xiàn)分離，而由于前列地爾是可以在油水兩相之間移動(dòng)，加入大量的洗脫液或者淋洗液后，會(huì)改變其相分配系數(shù)。經(jīng)過申請(qǐng)人實(shí)際試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，使用洗脫液的量越大，前列地爾在水相中的含量就越高。2）前列地爾注射液中前列地爾濃度僅為5μg/ml，在油相中的濃度為微克級(jí)，在水相中的濃度可能為納克甚至皮克級(jí)，如果再加入洗脫液或者淋洗液，則濃度太低，需要非常復(fù)雜的再濃縮操作后才有測量其含量的可能性。?

在以往發(fā)表的文獻(xiàn)中，并未見到任何測量前列地爾注射液相分配系數(shù)的報(bào)道。申請(qǐng)人經(jīng)過潛心研究發(fā)明了前列地爾注射液相分配系數(shù)的有效測量方法，并進(jìn)行了相關(guān)的驗(yàn)證。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種可以測量前列地爾注射液中前列地爾相分配系數(shù)的有效方法。?

????本發(fā)明者進(jìn)行研究后發(fā)現(xiàn)，使用Sartorius公司的Vivaspin系列超濾分離系統(tǒng)對(duì)藥液進(jìn)行處理后，使用AssayDesign公司的前列地爾ELISA試劑盒進(jìn)行檢驗(yàn)，可以解決前述課題，并進(jìn)行了相關(guān)的方法學(xué)驗(yàn)證。?

????本發(fā)明目的是通過如下技術(shù)方案是實(shí)施的：?

一種脂微球注射液中主藥相分配系數(shù)的測量方法，其中，采用超濾分離系統(tǒng)和生物試劑盒聯(lián)合的方法進(jìn)行測定。

其中，超濾分離系統(tǒng)為Sartorius公司的Vivaspin系列超濾分離系統(tǒng)；生物試劑盒為ELISA系列的試劑盒。?

其中，脂微球注射液為主藥含量小于100μg/mL。?

其中，脂微球注射液包括前列地爾注射液或貝前列素酸注射液或利馬前列素注射液或前列腺素A1注射液。?

一種脂微球注射液中主藥相分配系數(shù)的測量方法，其步驟包括：?

（1）精密量取待測藥液2-10ml，其中優(yōu)選為2ml，置于Vivaspin超濾離心管上層襯管中；

（2）將Vivaspin超濾離心管置于離心機(jī)中，使用水平轉(zhuǎn)子或角轉(zhuǎn)子進(jìn)行離心，優(yōu)選為水平轉(zhuǎn)子；離心力為15000-30000×g，優(yōu)選為20000×g；離心溫度為2-8℃，優(yōu)選為4-5℃；離心時(shí)間為15-30分鐘，優(yōu)選為20分鐘；進(jìn)行離心操作；