[發明專利]一種水稻基因組DNA的提取方法在審
| 申請號: | 201310559435.5 | 申請日: | 2013-11-05 |
| 公開(公告)號: | CN103555712A | 公開(公告)日: | 2014-02-05 |
| 發明(設計)人: | 梁衛紅;李佳佳;樓晨;林群婷;楊丹丹;王俊杰;郝雨帆 | 申請(專利權)人: | 河南師范大學 |
| 主分類號: | C12N15/10 | 分類號: | C12N15/10 |
| 代理公司: | 暫無信息 | 代理人: | 暫無信息 |
| 地址: | 453000 *** | 國省代碼: | 河南;41 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 一種 水稻 基因組 dna 提取 方法 | ||
1.一種水稻基因組DNA的提取方法,其特征在于包括如下步驟:
(1)取新鮮水稻黃花苗材料液氮研磨,化凍前將粉末轉移至預熱至60-70℃的CTAB緩沖液中,輕輕轉動離心管,輕柔混勻,水浴保溫1-3h。
(2)將裂解混合物從水浴取出,冷卻至室溫后,加入0.8-1.2倍體積的氯仿/異戊醇,氯仿/異戊醇的體積比為20—30:1,輕輕顛倒混合成乳濁液;
(3)室溫4500-5500rpm離心8-15min,將上層水相轉至新容器中,加1/1000-2/100體積的RNase?A溶液,輕柔顛倒混勻,36-38℃保溫20min-40min;
(4)加入0.6-0.8倍體積的異丙醇,待有白色絲狀物產生,收集白色絲狀物;
(5)將收集絲狀DNA用60%-80%乙醇洗滌2次;
(6)將洗滌后的DNA在室溫空氣干燥。
2.根據權利要求1所述的提取方法,所述的CTAB緩沖液的pH值為7.9-8.1之間,包括Tris-HCl緩沖溶液,EDTA,NaCl以及CTAB,使用前加入0.2%β-巰基乙醇。
3.根據權利要求1所述的提取方法,所述的氯仿/異戊醇的體積比是24:1。
4.根據權利要求1所述的提取方法,所述的RNase?A的濃度為8-20mg/mL。
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