[發明專利]一種雙功能配體靶向樹突狀細胞腫瘤疫苗及其制備方法

有效

• 申請號: 201310557996.1
• 申請日: 2013-11-11
• 公開（公告）號: CN104623646B
• 公開（公告）日: 2018-05-18
• 發明（設計）人: 盧小玲;趙永祥;賴春慧
• 申請（專利權）人: 廣西醫科大學
• 主分類號: A61K39/00
• 分類號: A61K39/00;A61K47/24;A61K47/26;A61K9/127;A61P35/00
• 代理公司: 深圳市順天達專利商標代理有限公司 44217
• 代理人: 郭偉剛;周嬌嬌

1.一種雙功能配體靶向樹突狀細胞的腫瘤疫苗的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、將棕櫚酰油酰磷脂酰膽堿、膽固醇、聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、雙十二烷基二甲基溴化銨、軟脂酸-甘露糖酯、α-生育酚按照摩爾比為49.8：40：5：3：2：0.2的比例混合后，通過真空旋轉蒸發后干燥，再重懸過濾得甘露糖修飾的納米脂質體；該步驟中真空旋轉蒸發的轉速為200rpm/min，時間為10-20分鐘，水浴溫度為40度，所述干燥的時間為2-4小時，所述重懸采用4-羥乙基哌嗪乙磺酸緩沖液水浴超聲5-10分鐘，所述過濾中采用孔徑為200nm、100nm和50nm的聚碳酸酯膜；

S2、使用磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-馬來酰亞胺制備膠束液，將CpG-寡聚脫氧核苷酸溶液加入所述膠束液中，在氮氣氛圍中反應30-60分鐘，加入與磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-馬來酰亞胺等摩爾的β-半胱胺，孵育30-60分鐘；隨后將孵育液加入步驟S1制得的甘露糖修飾的納米脂質體的溶液中，反應30-45分鐘，得到雙功能配體修飾的納米脂質體；

S3、通過反復融凍法從腫瘤細胞中提取腫瘤抗原肽；該步驟中將型號為H22或4T1的腫瘤細胞的重懸液用封口膜密封，在液氮中反應10-20分鐘，再在37℃水浴反應10-20分鐘，如此反復凍融，最后在600rpm轉速下離心10分鐘收集上清得到所述腫瘤混合抗原肽；

S4、通過凍干-再水化法將腫瘤抗原肽包裹進所述功能配體修飾的納米脂質體內得雙功能配體靶向樹突狀細胞的腫瘤疫苗；

所述步驟S4具體包括：在步驟S2制得的雙功能配體修飾的納米脂質體中加入所述腫瘤抗原肽以及與所述雙功能配體修飾的納米脂質體等摩爾的蔗糖，通過凍干-再水化法制備雙功能配體靶向樹突狀細胞的腫瘤疫苗。

2.根據權利要求1所述的雙功能配體靶向樹突狀細胞的腫瘤疫苗的制備方法，其特征在于，所述步驟S2中將孵育液與步驟S1制得的甘露糖修飾的納米脂質體的溶液在55度水浴反應30-45分鐘。

3.根據權利要求1所述的雙功能配體靶向樹突狀細胞的腫瘤疫苗的制備方法，其特征在于，所述步驟S3中反復凍融5次。

4.一種雙功能配體靶向樹突狀細胞的腫瘤疫苗，其特征在于，采用權利要求1-3中任意一項所述的雙功能配體靶向樹突狀細胞的腫瘤疫苗的制備方法制得。