[發(fā)明專利]一種單管復(fù)合擴(kuò)增檢測(cè)人類五條染色體非整倍體的試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310555078.5
• 申請(qǐng)日: 2013-11-08
• 公開（公告）號(hào): CN103555849A
• 公開（公告）日: 2014-02-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 呂時(shí)銘;朱宇寧;薛佳;陳雁;張民;鄭衛(wèi)國(guó);葛海鵬
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 無錫中德美聯(lián)生物技術(shù)有限公司;杭州博圣生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專利商標(biāo)代理有限公司 32200
• 代理人: 李紀(jì)昌;曹翠珍

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)領(lǐng)域，涉及熒光定量PCR技術(shù)（QF-PCR），具體涉及一種快速高通量檢測(cè)人類常染色體21號(hào)、18號(hào)、13號(hào)以及性染色體X、Y的STR基因型的試劑盒，用于上述五條染色體非整倍體的檢測(cè)。

背景技術(shù)

染色體病是導(dǎo)致出生缺陷常見的一類遺傳性疾病，約占活產(chǎn)嬰兒的0.6%左右，主要表現(xiàn)為智力低下、發(fā)育遲緩并伴有多個(gè)器官畸形，給社會(huì)和家庭帶來沉重的精神和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。活產(chǎn)兒染色體異常主要包括21三體綜合征、18三體綜合征、13三體綜合征，以及性染色體數(shù)目異常。

21三體綜合征又稱唐氏綜合征、先天愚型，在新生兒的發(fā)病率為1/800-1/600，是一種嚴(yán)重的先天性智力障礙疾病，易并發(fā)心臟病、白血病、免疫功能低下等。18三體又稱Edward綜合征，在新生兒的發(fā)病率為1/8000-1/3500，主要臨床表現(xiàn)為智力低下，生長(zhǎng)發(fā)育遲緩、多發(fā)畸形等。13三體又稱Patau綜合征，在新生兒的發(fā)病率為1/7000-1/5000，表現(xiàn)為多發(fā)性嚴(yán)重臟器畸形和智力低下，多在嬰兒期夭折。這三種是目前新生兒中最常見的常染色體三體綜合征，尚無有效治療方法，只能通過遺傳咨詢和產(chǎn)前診斷進(jìn)行預(yù)防。

性染色體數(shù)目異常主要有：Klinefelter綜合征（47，XXY），超雄綜合征（47，XYY），超雌綜合征（47，XXX），Turner綜合征（45，X）。這些疾病患者的共同臨床特征是性發(fā)育不全或兩性畸形，部分表現(xiàn)為原發(fā)性閉經(jīng)、生殖力下降或智力輕度低下等特征，為患者自身和家庭帶來了巨大的痛苦，早期診斷和干預(yù)可以有效緩解病情。

我國(guó)大規(guī)模開展上述染色體病診斷的主要手段是細(xì)胞遺傳學(xué)染色體核型分析，產(chǎn)前進(jìn)行絨毛、羊水或臍血染色體核型分析，出生后行外周血染色體檢查。進(jìn)行產(chǎn)前診斷時(shí)，一般是取孕中期的羊水20mL，在體外培養(yǎng)羊水中的胎兒細(xì)胞，對(duì)分裂中期的細(xì)胞核進(jìn)行染色體核型分析和染色體數(shù)目異常的診斷。該方法準(zhǔn)確、可靠，是目前產(chǎn)前診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但是所需羊水量大且需體外培養(yǎng)，導(dǎo)致診斷時(shí)期只能局限在孕16-23周，且存在檢測(cè)周期長(zhǎng)（2-3周時(shí)間）、檢測(cè)通量低下等諸多問題，已難以滿足臨床日益增長(zhǎng)的診斷需求。熒光原位雜交技術(shù)（FISH）作為染色體非整倍體異常常見的輔助診斷方法，雖可在48小時(shí)內(nèi)快速診斷，但該方法也建立在繁瑣的手工操作基礎(chǔ)上，依賴人工分析，存在檢測(cè)通量低下等問題。因此，發(fā)展一種快速、準(zhǔn)確、通量高、自動(dòng)化程度強(qiáng)的診斷方法十分必要。

QF-PCR是一種快速分子診斷技術(shù)，基于熒光標(biāo)記擴(kuò)增技術(shù)和電泳技術(shù)對(duì)染色體上的STR（短串聯(lián)重復(fù)序列）進(jìn)行檢測(cè)，通過定性、定量分析STR的多態(tài)性來診斷目標(biāo)染色體數(shù)目。STR廣泛分布于人類整個(gè)基因組，以2-6bp的核心單位進(jìn)行多次重復(fù)，核心單位的重復(fù)數(shù)目的變化構(gòu)成了STR基因座在人群中的遺傳多態(tài)性。STR遵循孟德爾遺傳規(guī)律，具有高雜合度、易于檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)，基于多色熒光標(biāo)記技術(shù)、PCR擴(kuò)增技術(shù)和毛細(xì)管電泳，能夠達(dá)到快速、準(zhǔn)確、半自動(dòng)化、高通量檢測(cè)的目的。目前用于5種染色體數(shù)目檢測(cè)的QF-PCR商品化試劑盒，如英國(guó)的Aneuploidy、Elucigene?QSTR，瑞典的Chromo?Quent、Deryser，美國(guó)的ABI的TrueScience?TM?Aneuploidy?STR?Kits等，所選擇的STR基因座主要基于白人的群體樣本，未必適用于中國(guó)人群；國(guó)內(nèi)自主開發(fā)的QF-PCR試劑盒（或專利）檢測(cè)通量相對(duì)較低，一般需要多組反應(yīng)體系才能實(shí)現(xiàn)五條染色體的檢測(cè)，操作繁瑣。同時(shí)，國(guó)內(nèi)外現(xiàn)有的用于染色體數(shù)目診斷的QF-PCR試劑盒或?qū)＠狈?duì)STR基因型分析的標(biāo)準(zhǔn)化，檢測(cè)結(jié)果表述難以統(tǒng)一，不利于臨床檢測(cè)的常規(guī)開展和質(zhì)量控制。因此有必要開發(fā)一個(gè)針對(duì)中國(guó)人群的能同時(shí)檢測(cè)多種染色體異常的高通量、快速、可靠、標(biāo)準(zhǔn)化的QF-PCR試劑盒。

本發(fā)明試劑盒針對(duì)中國(guó)人群常染色體21號(hào)、18號(hào)、13號(hào)以及性染色體X、Y非整倍體的臨床診斷進(jìn)行設(shè)計(jì)，與現(xiàn)有技術(shù)相比有以下特點(diǎn)：1）單管復(fù)合擴(kuò)增檢測(cè)：采用五色熒光標(biāo)記技術(shù)，能夠?qū)?3個(gè)STR基因座在同一組反應(yīng)體系里進(jìn)行檢測(cè)，快速、通量高、使用方便；2）采用中國(guó)人群的高多態(tài)性STR基因座：所用23個(gè)STR基因座是從前期大樣本群體遺傳學(xué)研究中挑選出來的，在中國(guó)漢族人群中均具有較高的多態(tài)性，能獲得較高的診斷效能，達(dá)到準(zhǔn)確診斷的目的；3）STR檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)化：本試劑盒提供了等位基因分型標(biāo)準(zhǔn)品，可以做到STR等位基因的精確分型，使STR檢測(cè)結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)化，便于臨床診斷工作開展和質(zhì)量控制。上述特點(diǎn)為該試劑盒的臨床應(yīng)用提供了可靠保障。

參考文獻(xiàn)