[發明專利]一種同時檢測四種腫瘤標志物的化學發光試劑盒及其制備方法

無效

• 申請號: 201310553615.2
• 申請日: 2013-11-08
• 公開（公告）號: CN103558384A
• 公開（公告）日: 2014-02-05
• 發明（設計）人: 章登吉;程禹;段新偉;張波
• 申請（專利權）人: 點亮生物科技無錫有限公司
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N21/76
• 代理公司: 上海君鐵泰知識產權代理事務所(普通合伙) 31274
• 代理人: 潘建玲

1.一種同時檢測四種腫瘤標志物的化學發光試劑盒，其特征在于，包括：

經過鍍膜處理的試劑盒，并且該試劑盒內含有用腦源性神經營養因子、表皮生長因子、髓過氧化物酶、和催乳素四種抗原標被的以圓形陣列排布的酶標板、聚氧乙烯山梨醇單月桂酸單脂和牛血清白蛋白抗體、稀釋液、一份陽性血清對照樣本、一份陰性血清對照樣本、洗滌劑、處理酶、發光液。

2.一種同時檢測四種腫瘤標志物的化學發光試劑盒及其制備方法，其特征在于，包含以下步驟：

第一步，制備抗體包被；

將0.1-20ng的腦源性神經營養因子、表皮生長因子、髓過氧化物酶、和催乳素分別加入0.01-0.1mol/l的磷酸鹽緩沖溶液中；

進一步地，用全自動點樣儀提取10-100nl的上述含有四種特異性因子的磷酸鹽緩沖溶液，點樣于用等離子處理過的ELISA板的孔中；

進一步地，將點樣好的ELISA板置于2-8℃的溫度下包被16-24小時；

第二步，對第一步中ELISA板分別進行澆注、封閉、洗滌、晾干后，再保存起來待用；

首先，向PH值為7.4±0.2的磷酸鹽緩沖液中，依次加入0-0.05%的聚氧乙烯山梨醇單月桂酸單脂和3%的牛血清白蛋白，攪拌均勻后，向第一步中的ELISA板中澆注；向PH值為7.4±0.2的磷酸鹽緩沖液中，依次加入0-0.05%的聚氧乙烯山梨醇單月桂酸單脂和5-10%的脫脂奶粉，攪拌均勻后，向第一步中的ELISA板中澆注；

進一步地，將該澆注好的ELISA板放在2-8℃的溫度下封閉放置16-24小時或者放在37℃下封閉放置2±0.5小時，或者室溫封閉3±0.5小時；

進一步地，用含有非離子型表面活性劑的磷酸鹽緩沖溶液對封閉好的ELISA板進行洗滌、晾干后，置于2-8℃的溫度下保存待用；

第三步，上樣，并將ELISA板放入孵育振蕩器中孵育抗體；

首先，取多份病人的血清樣本、1份經篩查過的正常人的陰性對照樣本和1份陽性對照樣本；

進一步地對PH值為7.4±0.2的含有1%牛血清白蛋白、0.05%聚氧乙烯山梨醇單月桂酸單脂的磷酸鹽緩沖溶液樣本稀釋液進行稀釋；稀釋好的待測樣本與配制好的標曲點，再向各個反應孔中加入處理酶；

進一步地，將加好溶液的ELISA板放入孵育振蕩器中，在18-25℃的室溫條件下反應；

第四步，將稀釋液加入試劑盒中；

用含有聚氧乙烯山梨醇單月桂酸單脂的磷酸鹽緩沖溶液作為洗液，對第三步中反應后的ELISA板洗滌，再對其進行稀釋后，分別向試劑盒中的每個孔中加入稀釋后的溶液；

第五步，用CCD成像儀拍攝成像，并結合圖像分析軟件計算出圖像的IDV值，根據IDV值繪制標準曲線，并且計算出樣本濃度結果；

首先，將穩定的過氧化溶液與魯米諾或增強子以1:1混合配制成發光液；

進一步地，向試劑盒的每個孔中加入配制好的發光液，在1-10分鐘內用?CCD成像儀拍攝成像；

進一步地，由與CCD成像儀配套的圖象分析軟件將拍攝的圖像處理成IDV值；

進一步地，根據IDV?值繪制標準曲線，并且計算出樣本濃度結果；

第六步，運用回歸模型（softMax）和Excel表格對樣本濃度結果進行計算和統計學分析，經綜合分析，對該38份病人血清樣本的檢測檢測結果為100%陽性，即敏感性為100%。

3.根據權利要求1所述的一種同時檢測四種腫瘤標志物的化學發光試劑盒，其特征在于，第一步中，用全自動點樣儀點樣，是將抗體探針點置在ELISA孔板內的圓形圈邊上，形成圓形陣列化的捕獲表面。

4.根據權利要求1所述的一種同時檢測四種腫瘤標志物的化學發光試劑盒，其特征在于，第四步中的試劑盒的四壁是經過鍍膜處理的。