[發明專利]一種基于生物芯片快速檢測PP65的方法

有效

• 申請號: 201310549370.6
• 申請日: 2013-11-07
• 公開（公告）號: CN103558380A
• 公開（公告）日: 2014-02-05
• 發明（設計）人: 張波;王永虎;夏宇
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第三軍醫大學第一附屬醫院
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;C12Q1/68
• 代理公司: 重慶市前沿專利事務所(普通合伙) 50211
• 代理人: 譚春艷

1.一種基于生物芯片快速檢測PP65的方法，包括以下步驟：

（1）取兩張晶芯基因芯片，用Binding?buffer將100ng?FITC綠色熒光標記PP65巨細胞病毒抗體2稀釋至100μL，并加入等體積的DMSO，然后點樣于基因芯片中央，37℃孵育10～14小時；

（2）取出玻片，用Washing?buffer清洗3～5次，加入80～100μL0.1～0.3%BSA封閉12小時以上；

（3）取出玻片，用Washing?buffer清洗3～5次，加入待檢樣品，37℃孵育10～14小時；

（4）用Washing?buffer清洗3～5次，加入1～3μM?HEX紅色熒光標記的與人巨細胞病毒PP65抗原具有特異性的適配子，37℃孵育10～14小時，所述適配子為SEQ?ID?No.1～SEQ?ID?No.6的序列之一；

（5）用Washing?buffer清洗3～5次，熒光顯微鏡下觀察；如果待檢樣品中有PP65抗原，則在顯微鏡下既能看到紅色熒光又能看到綠色熒光；如果待檢樣品中沒有PP65抗原，則在顯微鏡下只能看到紅色熒光，不能看到綠色熒光。

2.根據權利要求1所述的一種基于生物芯片快速檢測PP65的方法，其特征在于：步驟（4）中所述適配子SEQ?ID?No.1～SEQ?ID?No.6的二級構象依次分別為：

3.根據權利要求1或2所述的一種基于生物芯片快速檢測PP65的方法，其特征在于：所述的Binding?buffer為：PBS,5mM?MgCl₂,0.05%tween-20，pH7.5。

4.根據權利要求1或2所述的一種基于生物芯片快速檢測PP65的方法，其特征在于：所述Washing?buffer為：PBS,5mM?MgCl₂,0.01%tween-20，pH7.5。