[發明專利]一種可視化生物芯片的檢測方法

有效

• 申請號: 201310546683.6
• 申請日: 2013-11-07
• 公開（公告）號: CN103575894A
• 公開（公告）日: 2014-02-12
• 發明（設計）人: 李周敏;李鐘卉;張立柱
• 申請（專利權）人: 南京祥中生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/68
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 汪旭東

技術領域

本發明涉及一種生物芯片檢測方法，尤其涉及一種便于直觀判斷芯片的質量、可視化檢測待測樣品中多指標的生物芯片的檢測方法。

背景技術

現有的生物芯片是指包被在固定載體上的高密度DNA、抗原、抗體、細胞或組織的微陣列。利用生物大分子具有特異相互識別的能力而將他們有序的排列在固相載體基片（孔板、膜、玻璃片，高聚物載體等）上，與檢測樣品和標記的生物分子同時反應或雜交，經過自動閱讀設備可獲得大量有用的生物信息。目前生物芯片檢測方法主要有熒光法，化學發光法、催化顯色法等。由于熒光法和化學發光法等檢測設備價格昂貴，不利于在食品安全檢測領域推廣。利用納米材料或者生物酶催化其相應底物顯色，根據反應后終點顏色的深淺可以目視定性判斷樣品中待測物的含量，也可以通過儀器測得灰度值，通過計算灰度值得出樣品中待測組分的含量，大大降低檢測成本。同時，傳統的生物芯片在檢測樣品之前，芯片產品都是無色的，無法直觀判斷芯片的質量，如有無漏點等。所以在芯片上加上有色的點樣物可以作為產品質控，便于直接觀測。

發明內容

針對以上問題本發明提供了一種便于直觀判斷芯片的質量、可視化檢測待測樣品中多指標生物芯片的檢測方法。

為了解決以上問題本發明提供了一種可視化的生物芯片，由載體基片及載體基片上的點樣物組成，點樣物包括待測物的抗原或抗體或受體和有色偶聯物或有色蛋白，兩者在PBS緩沖溶液中混合；所述的有色偶聯物是將有色化合物和蛋白質以共價鍵形式偶聯。

所述的有色蛋白包括血紅蛋白，熒光蛋白，血藍蛋白；

所述的有色化合物包括食用色素或有色染料；

所述的蛋白質為親水性蛋白；

所述的PBS緩沖液的配制：用137?mmol/L氯化鈉、2.7?mmol/L氯化鉀、10?mmol/L磷酸二氫鈉、2?mmol/L磷酸二氫鉀配制pH?7.4的PBS緩沖液。

所述的蛋白質包括牛血清白蛋白（BSA）、雞卵清蛋白（OVA）、人血清白蛋白（HSA）、兔血清白蛋白（RSA）、鑰孔血藍蛋白（KLH）以及多聚賴氨酸（PLL）。

所述的偶聯方法包括以下幾種：含羧基的化合物可用包括碳二亞胺法、混合酸酐法、N?-羥基丁二酰亞胺活性酯法的方法；含氨基的化合物可用包括戊二醛法、鹵代硝基苯法、二異氰酸酯法、重氮化法的方法；含羥基的化合物可用包括琥珀酸酐法、光氣法、鹵代羧酸法的方法；含有巰基、醛、酮結構的化合物均可利用相應的雙功能團試劑與蛋白偶聯的方法。

所述的載體片基為透明的多孔板、高聚物片基、膜、玻片；

所述的多孔板包括24孔板，48孔板，96孔板，384孔板。

取上述點樣物于載體片基的反應區內，再用小牛血清封閉載體基片上沒有結合點樣物的活性基團。

一種可視化生物芯片的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)在上述生物芯片的部分反應孔內分別加入含有不同濃度梯度的檢測目標物的混合標準溶液，在剩余反應孔內分別加入待測物溶液，繼續向所有反應孔中依次加入檢測目標物所對應的單克隆抗體和標記的羊抗鼠IgG，于20~37℃水浴中反應10~20min，洗滌液洗滌；

(2)?所有反應孔內繼續加入顯色劑，顯色反應2~5min后，終止反應；

(3)?反應后終點顏色的深淺可以目視定性判斷樣品中待測物的含量或者使用儀器進行圖像采集，根據檢測目標物的灰度值以及標準溶液的濃度對數制作標準曲線，采用外標曲線法定量，分別計算待測物溶液中檢測目標物的含量。

所述的羊抗鼠IgG為納米材料或者生物酶標記，所述的顯色劑為生物催化劑及其底物或者化學催化劑及其底物；所述的洗滌液為鹽酸緩沖液、磷酸鹽緩沖液和Tris緩沖液。

所述的待測物為臨床樣品或動物源性食品，包括血樣、牛奶、奶粉、奶酪、飼料、尿液、動物組織、血清、蜂蜜、蜂皇漿、雞蛋和水產品。

所述點樣物的顏色在檢測前后發生變化，檢測前為有色偶聯物或者有色蛋白呈現的顏色；反應后利用納米材料或者生物酶催化相應底物顯色，呈現另一種顏色；反應后終點顏色的深淺可以目視定性判斷樣品中待測物的含量，也可以通過儀器測得灰度值，通過計算灰度值得出樣品中待測組分的含量。