[發明專利]從紅豆杉細胞培養液中制備高純度紫杉醇的方法

無效

• 申請號: 201310546214.4
• 申請日: 2013-11-06
• 公開（公告）號: CN103570647A
• 公開（公告）日: 2014-02-12
• 發明（設計）人: 熊興耀;楊星星;蘇小軍;王仁才
• 申請（專利權）人: 湖南農業大學
• 主分類號: C07D305/14
• 分類號: C07D305/14
• 代理公司: 廣州凱東知識產權代理有限公司 44259
• 代理人: 姚迎新

1.從紅豆杉細胞培養液中制備高純度紫杉醇的方法，其包括以下步驟：

（1）將紅豆杉細胞培養液進行固液分離，得到原液和細胞；然后將細胞破壁后過濾，得到濾液和濾渣；再將所述原液與濾液混合；

（2）將上述混合液體通過非極性大孔樹脂吸附層析柱富集，然后用蒸餾水沖洗，再用乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，并將洗脫液中的乙醇蒸干；

（3）向上述蒸干乙醇的洗脫液中加入萃取劑，進行兩次液液萃取，收集有機溶劑層，低溫真空干燥，得到大孔樹脂柱富集紫杉醇粗品；

（4）將上述粗品轉載于用堿性氧化鋁做填料的層析柱，用洗脫溶液進行洗脫，分部收集洗脫部分，并真空干燥，得到樣品；

（5）將上述樣品通過C18?高效液相色譜柱純化，然后用含甲醇溶液作流動相洗脫，分部收集紫杉醇洗脫部分，將收集的組分置于通風廚，揮發有機相，待出現結晶后轉至4℃冰箱放置24h，離心收集一部分晶體，然后將上清液繼續放置使結晶完全，離心收集另一部分晶體，再將收集的全部晶體冷凍干燥，得到高純度紫杉醇單體。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（1）中將所述培養液離心，獲得細胞，然后將細胞用勻漿機勻漿，再將勻漿后的糊狀流體加入等體積的乙醇進行超聲提取，并離心過濾后得到所述濾液。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（1）中將所述培養液經砂芯漏斗抽濾或經板框過濾，得到細胞，然后將細胞用勻漿機勻漿，再將勻漿后的糊狀流體加入等體積的乙醇進行超聲提取，并用砂芯漏斗抽濾，得到所述濾液。

4.根據權利要求2或3所述的方法，其特征在于：步驟（2）中采用體積濃度為75~85％乙醇溶液進行洗脫。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于：在步驟（3）中，向蒸干乙醇的洗脫液中加入等體積的萃取劑，萃取劑為1:1的二氯甲烷與水或為1:1的三氯甲烷與水。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于：步驟（4）采用三氯甲烷∶甲醇體積比為96:4的洗脫液。