[發(fā)明專利]一種檢測(cè)與肺癌易感性及化療敏感性相關(guān)基因的多態(tài)性的試劑盒及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310545712.7
• 申請(qǐng)日: 2013-11-06
• 公開（公告）號(hào): CN103589795A
• 公開（公告）日: 2014-02-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉昭前;陳娟;尹繼業(yè);郭成賢;王瑛;周宏灝
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中南大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 長(zhǎng)沙正奇專利事務(wù)所有限責(zé)任公司 43113
• 代理人: 盧宏

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測(cè)與肺癌易感性及化療敏感性相關(guān)基因的多態(tài)性的試劑盒及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

Wnt1誘導(dǎo)通路蛋白1（Wnt1?indμcible?signaling?pathway?protein?1，WISP1）是生長(zhǎng)因子高半胱氨酸蛋白61/結(jié)締組織生長(zhǎng)因子/腎母細(xì)胞瘤基因（CYR61/CTGF/NOV.CCN）家族的成員之一，對(duì)細(xì)胞增殖、粘附、生存等具有調(diào)節(jié)作用。

人類WISP1基因位于8q24.1-q24.3，有5個(gè)外顯子和4個(gè)內(nèi)含子，編碼367個(gè)氨基酸，編碼蛋白為40kDa。有研究表明，WISP1的表達(dá)水平與多種肺疾病相關(guān)，如急性肺損傷，肺纖維化及肺癌等。在非小細(xì)胞肺癌患者的癌組織中，WISP1呈高表達(dá)現(xiàn)象，并且其表達(dá)水平與非小細(xì)胞肺癌患者的預(yù)后相關(guān)。

研究報(bào)道WISP1基因多態(tài)性與多種疾病相關(guān)，并采用了不同的基因分型方法來進(jìn)行檢測(cè)。例如，A2364G(rs2929970)多態(tài)性與多種疾病相關(guān)。有研究采用Taqman探針法證明了它與脊柱骨關(guān)節(jié)炎相關(guān)；用溶解曲線法探究了此位點(diǎn)與高血壓的關(guān)系；還有用質(zhì)譜分型方法研究了它與結(jié)腸癌的關(guān)系。溶解曲線法及質(zhì)譜分型是針對(duì)大樣本多位點(diǎn)的高通量分型方法，而Taqman探針法是中通量分型的金標(biāo)準(zhǔn)，并且具有靈敏性高、花費(fèi)相對(duì)較少的優(yōu)點(diǎn)。

Taqman探針法是在PCR上下游引物間選取一段序列作為探針，并在探針上標(biāo)記熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán)，該探針可與模板結(jié)合，在延伸反應(yīng)中，當(dāng)引物合成至探針與模板結(jié)合處是，Taq酶的5’外切酶活性可以講解探針的5’端，使熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán)分離，釋放熒光。相對(duì)于傳統(tǒng)的限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性聚合酶鏈反應(yīng)（PCR-RFLP），Taqman探針法具有靈敏性更高、操作更簡(jiǎn)單的優(yōu)勢(shì)，且通量更高。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在提供一種檢測(cè)與肺癌易感性及化療敏感性相關(guān)基因的多態(tài)性的試劑盒，該試劑盒可用于制備檢測(cè)與肺癌易感性及化療敏感性相關(guān)基因多態(tài)性的試劑。

為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供的技術(shù)方案為：

所述檢測(cè)與肺癌易感性及化療敏感性相關(guān)基因的多態(tài)性的試劑盒中含有檢測(cè)WISP1基因C3290T位點(diǎn)的探針和引物，所述探針和引物能與WISP1基因C3290T位點(diǎn)前后的基因序列特異性結(jié)合并擴(kuò)增出包含WISP1基因C3290T位點(diǎn)的基因序列。

優(yōu)選地，所述探針和引物是與WISP1基因C3290T位點(diǎn)前后500bp的基因序列特異性結(jié)合并能擴(kuò)增出包含WISP1基因C3290T位點(diǎn)的基因序列。

優(yōu)選地，所述檢測(cè)與肺癌易感性及化療敏感性相關(guān)基因的多態(tài)性的試劑盒中含有如下探針：

FAM-TAAGTGCCTTAGCAAAAG-MGB（SEQ?ID?NO.1）；

VIC-ATTAAGTGTCTTAGCAAAAG-MGB（SEQ?ID?NO.2）；

該試劑盒中還含有如下引物：

5’-AGCTCTCTTCTTCCAAAGCTACATG-3’（SEQ?ID?NO.3）；

5’-TCTTGCATACGCATACACAAATATATG-3’（SEQ?ID?NO.4）。

其中，F(xiàn)AM吸收波長(zhǎng)485-505nm，發(fā)射波長(zhǎng)515-530nm；VIC吸收波長(zhǎng)515-535nm，發(fā)射波長(zhǎng)540-560nm；MGB為淬滅基團(tuán)。所述與肺癌易感性及化療敏感性相關(guān)基因?yàn)閃ISP1基因C3290T。

所述探針、引物及包含兩者的試劑盒均可應(yīng)用于制備檢測(cè)與肺癌易感性及化療敏感性相關(guān)基因多態(tài)性的試劑。

本課題組的前期研究表明，WISP1基因多態(tài)C3290T（rs2977549）可能通過影響WISP1在血漿中的表達(dá)水平，從而與肺癌易感性及其鉑類藥物化療敏感性相關(guān)，而之前并無相關(guān)報(bào)道。

WISP1?C3290T位點(diǎn)位于WISP1基因3’非翻譯區(qū)（3’ΜTR），在中國(guó)漢族人群中，其最小等位基因頻率（Minor?Allele?Freqμency,MAF）為38.3%。由于目前還沒有有關(guān)C3209T基因多態(tài)性及其功能的相關(guān)報(bào)道，本課題組近期研究才發(fā)現(xiàn)其與非小細(xì)胞肺癌鉑類藥物化療敏感性相關(guān)，所以還沒有人檢測(cè)過WISP1基因C3290T多態(tài)性，更沒有相關(guān)檢測(cè)的試劑盒產(chǎn)品面世。因此，探索檢測(cè)與肺癌易感性及化療敏感性相關(guān)基因的多態(tài)性的方法及產(chǎn)品顯得意義深遠(yuǎn)。

本發(fā)明的試劑盒能準(zhǔn)確、快速、簡(jiǎn)便地檢測(cè)與非小細(xì)胞肺癌鉑類藥物化療敏感性相關(guān)的基因位點(diǎn)（WISP1基因C3290T多態(tài)性）。