[發(fā)明專利]對亞型禽流感病毒進(jìn)行檢測過程中RNA樣品的收集

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310544096.3
• 申請日: 2013-11-06
• 公開（公告）號: CN103614492A
• 公開（公告）日: 2014-03-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李剛
• 申請（專利權(quán)）人: 李剛
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/93
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種實(shí)驗(yàn)方法，具體來說是指對亞型禽流感病毒進(jìn)行檢測過程中RNA樣品的收集。?

背景技術(shù)

禽流感病毒（AIV）屬甲型流感病毒。流感病毒屬于RNA病毒的正黏病毒科，分甲、乙、丙3個(gè)型。其中甲型流感病毒多發(fā)于禽類，一些亞型也可感染豬、馬、海豹和鯨等各種哺乳動物及人類；乙型和丙型流感病毒則分別見于海豹和豬的感染。一般來說，禽流感病毒與人流感病毒存在受體特異性差異，禽流感病毒是不容易?感染給人的。個(gè)別造成人感染發(fā)病的禽流感病毒可能是發(fā)生了變異的病毒。變異的可能性一是兩種以上的病毒進(jìn)入同一細(xì)胞進(jìn)行重組，如豬既可感染人流感病毒，又可能感染禽流感病毒，每種病毒都具有8個(gè)基因片段，從理論上講，可以形成256個(gè)新的重組病毒；二是病毒基因位點(diǎn)由于某種因素的影響，1983年4月，美國賓夕法尼亞州曾暴發(fā)H5N2型病毒引起的雞和火雞低致病性禽流感，由于沒有及時(shí)得到有效控制，到同年10月份，同樣的H5N2型毒株突然由低致病性變成高致病性，造成禽類大量死亡。因此對于禽流感病毒的研究刻不容緩。?

發(fā)明內(nèi)容

為克服上述技術(shù)問題，我們提出了以下技術(shù)方案：?

對亞型禽流感病毒進(jìn)行檢測過程中RNA樣品的收集，首先對樣品進(jìn)行酶切鑒定，即在適宜的溫水中進(jìn)行消化，至少5小時(shí)，然后用百分之二點(diǎn)三的瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行測試，檢驗(yàn)其結(jié)果；第二步是對其進(jìn)行序列測定，即對于回收的陽性產(chǎn)物，以此作為模版繼續(xù)擰PCR擴(kuò)增，然后連接、轉(zhuǎn)化，得到陽性克隆物，對其進(jìn)行測序；去除PCR反應(yīng)中的反應(yīng)物，加入適量的酶混合物，二者重量比例為5：1；充分混合后烤箱中烘干；溫浴；懸浮沉淀物；吸取沉淀物即可。

本發(fā)明中，在進(jìn)行懸浮之前，可以進(jìn)行低速離心，最多三分鐘。?

本發(fā)明中，所述酶切鑒定和序列鑒定兩個(gè)步驟之間，時(shí)間間隔不能超過12小時(shí)。?????

本發(fā)明的有益效果是，可以有效避免蛋白氨基酸丟失，且穩(wěn)定性好，表達(dá)量高，具有成本低，操作簡單的優(yōu)點(diǎn)。

具體實(shí)施方式

對亞型禽流感病毒進(jìn)行檢測過程中RNA樣品的收集，首先對樣品進(jìn)行酶切鑒定，即在適宜的溫水中進(jìn)行消化，至少5小時(shí)，然后用百分之二點(diǎn)三的瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行測試，檢驗(yàn)其結(jié)果；第二步是對其進(jìn)行序列測定，即對于回收的陽性產(chǎn)物，以此作為模版繼續(xù)擰PCR擴(kuò)增，然后連接、轉(zhuǎn)化，得到陽性克隆物，對其進(jìn)行測序；去除PCR反應(yīng)中的反應(yīng)物，加入適量的酶混合物，二者重量比例為5：1；充分混合后烤箱中烘干；溫??；懸浮沉淀物；吸取沉淀物即可；在進(jìn)行懸浮之前，可以進(jìn)行低速離心，三分鐘；所述酶切鑒定和序列鑒定兩個(gè)步驟之間，時(shí)間間隔12小時(shí)。?????

以上所述，僅為本發(fā)明較佳的具體實(shí)施方式，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此，任何熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明披露的技術(shù)范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案及其發(fā)明構(gòu)思加以等同替換或改變，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。