[發明專利]一種針對微藻的微管分離方法

在審

• 申請號: 201310538042.6
• 申請日: 2013-10-29
• 公開（公告）號: CN103820324A
• 公開（公告）日: 2014-05-28
• 發明（設計）人: 孫良昱;崔文靖;陳坤明
• 申請（專利權）人: 西北農林科技大學
• 主分類號: C12N1/12
• 分類號: C12N1/12
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明具體涉及一種針對微藻的微管分離方法。

背景技術

人類對微藻資源的研究僅僅是最近一百年的事，對野生水樣中的微藻進行分離，是微藻研究的基礎工作。在微藻的人工分離方法當中，廣受認可的分離方法主要包括：微吸管分離、水滴分離法、稀釋分離法、平板分離法，其中微吸管分離法被認為是最直接、最高效的人工分離方法而備受推崇。

然而，微吸管的制作方法以及微吸管分離方法尚未形成一套標準。同時，最重要的，則是因為涉及到顯微鏡下操作以及手動操作，所以以往制作的微吸管以及其操作方法對實驗者的素質要求很高，需要較長時間的練習。因此針對這些問題，作者采用了與以往不同的實驗材料來制作微吸管，并對以往操作方法進行了更改，使其操作更為簡便，同時減少了實驗成本。

發明內容

本發明的目的是提供一種針對微藻的微管分離方法，摒棄了以往使用膠帽吸管制作微吸管并進行操作的方法，在制作微吸管的速度、成本上得到了明顯的優勢，并結合新的微吸管制定了新的藻微管分離方法，也得到了操作上的明顯優勢。

本發明的一種針對微藻的微管分離方法，具體步驟如下：

步驟1：準備材料：玻璃點樣毛細管(內徑0.5mm)、酒精燈、鑷子、使用黃槍頭的移液槍、黃色移液槍頭，擴大培養后的野外水樣、普通光學顯微鏡、凹載玻片若干片、蒸餾水；

步驟2：用鑷子夾住點樣毛細管的一端，手捏毛細管的另一端；

步驟3：將毛細點樣管的中間且靠近鑷子一段距離的部位用酒精燈火焰灼燒，同時手捏微吸管并向外拉扯，待毛細管融化并拉扯斷后，手所捏的一段毛細管則將在下一步中使用；

步驟4：在顯微鏡下觀察還未完成的毛細管尖頭部，根據需要分離的微藻來斟酌所需毛細管尖端孔徑，并選擇合適位置掰斷，使其有吸入口；

步驟5：將擴大培養后的野外水樣使用移液槍吸取30微升后打入凹載玻片的凹槽內，并置于顯微鏡下，使用顯微鏡調清晰水樣視野后，手捏制作好的微吸管，其尖端伸至顯微鏡視野內，但不要觸碰凹載玻片凹槽內的水滴；

步驟6：選取視野內需要分離的微藻(如果視野內沒有，可調節顯微鏡的視野，手持微吸管的尖端最好保持在顯微鏡視野內不要離開)，輕點目標微藻周圍的水，微吸管會因為毛細現象將水吸入管內，同時也會帶入目標微藻；

步驟7：修剪移液槍黃槍頭的槍尖，使微吸管正好可以貼緊槍尖的孔穿入，同時將此組合體接到移液槍上；

步驟8：將剛剛使用毛細管吸取的水樣打至另一個干凈的凹載玻片凹槽內，鏡檢所吸取的水樣中是否都是所需的目標微藻，如果有少量其它雜藻，可使用蒸餾水稀釋凹槽內的藻液，同時制作新的微吸管再進行第二次甚至多次的分離，直至鏡檢后只觀察到目標微藻為止；

步驟9：將單種目標微藻使用新的毛細管吸出并通過上述技術流程接種至滅過菌的適宜藻類生長的液體培養基中，封口膜封口后，放置于適宜的培養環境令其繁殖，等待數日，待肉眼可見培養基變綠后通過鏡檢，如果鏡下均為同種藻類則分離成功。

本發明的有益效果為：

1.摒棄了以往使用膠帽吸管制作微吸管的方法，在制作微吸管的速度、成本、操作上得到了明顯的優勢。

2.新的微吸管與其操作方法使其在進行分離工作時更容易手持并把握輕重，對實驗操作者的要求及訓練時間降低、減少。

3.新方法中所使用的器材均為已經成型的標準器材，在今后的實驗中可以更方便的獲得材料以及方便實驗步驟的標準化。

具體實施方式

為了使本發明的目的及優點更加清楚明白，以下結合實施例對本發明進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發明，并不用于限定本發明。

本具體實施：一種針對微藻的微管分離方法，具體步驟如下：

步驟1：準備材料：玻璃點樣毛細管(內徑0.5mm)、酒精燈、鑷子、使用黃槍頭的移液槍、黃色移液槍頭，擴大培養后的野外水樣、普通光學顯微鏡、凹載玻片若干片、蒸餾水；

步驟2：用鑷子夾住點樣毛細管的一端，手捏毛細管的另一端；

步驟3：將毛細點樣管的中間且靠近鑷子一段距離的部位用酒精燈火焰灼燒，同時手捏微吸管并向外拉扯，待毛細管融化并拉扯斷后，手所捏的一段毛細管則將在下一步中使用；

步驟4：在顯微鏡下觀察還未完成的毛細管尖頭部，根據需要分離的微藻來斟酌所需毛細管尖端孔徑，并選擇合適位置掰斷，使其有吸入口；