[發明專利]一種促使質粒發生連接反應的方法

在審

• 申請號: 201310536243.2
• 申請日: 2013-11-04
• 公開（公告）號: CN103757040A
• 公開（公告）日: 2014-04-30
• 發明（設計）人: 劉軍
• 申請（專利權）人: 劉軍
• 主分類號: C12N15/70
• 分類號: C12N15/70;C12N15/66
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種生化實驗室的試驗方法，具體來說一種促使質粒發生連接反應的方法。?

背景技術

?質粒（Plasmid）是附加到細胞中的非細胞的染色體或核區DNA原有的能夠自主復制的較小的DNA分子（即細胞附殖粒、又胞附殖粒）。大部分的質粒雖然都是環狀構形，然而目前也發現有少數的質粒屬于線性構形，它存在于許多細菌以及酵母菌等生物中，乃至于植物的線粒體等胞器中。天然質粒的DNA長度從數千堿基對至數十萬堿基對都有。質粒天然存在于這些生物里面，有時候一個細胞里面可以同時有一種乃至于數種的質粒同時存在。質粒的套數（copy?number）在細胞里從單一到數千都有可能。有時有些質粒含有某種抗藥基因（如大腸桿菌中就有含有抗四環素基因的質粒）。有一些質粒攜帶的基因則可以賦予細胞額外的生理代謝能力，乃至于在一些細菌中提高它的致病力。一般來說，質粒的存在與否對宿主細胞生存沒有決定性的作用。它是基因工程最常見的運載體。?

發明內容

為克服上述技術問題，我們提出了以下技術方案：?

一種促使質粒發生連接反應的方法，步驟如下：首先準備好目標DNA，以及ＤＮＡ連接酶，將其膠回收后充分混勻；２１攝氏度條件下反應１２小時；在操作臺中，將全部能量轉化至大腸感覺的感受態細胞中；所述大腸感覺感受細胞態需要事先經過氯化鈣溶液沖洗；冷浴３－５分鐘；每隔１０分鐘混合、振蕩、分離、懸置；上述行為反復十次；用移液槍懸浮細胞，涂抹在瓊脂平板上；1個小時后，倒置平板，在37攝氏度的條件下培養15小時，即得。

本發明中,用移液槍懸浮細胞之前需要保留上清液。?

本發明中,?最后可以用滅過菌的竹棒挑取目標質粒。?

本發明的有益效果是，成本較低、重復性好，轉化效率低，而且可以比較完全的對比目的片段。?

具體實施方式

一種促使質粒發生連接反應的方法，步驟如下：首先準備好目標DNA，以及ＤＮＡ連接酶，將其膠回收后充分混勻；２１攝氏度條件下反應１２小時；在操作臺中，將全部能量轉化至大腸感覺的感受態細胞中；所述大腸感覺感受細胞態需要事先經過氯化鈣溶液沖洗；冷浴３分鐘；每隔１０分鐘混合、振蕩、分離、懸置；上述行為反復十次；用移液槍懸浮細胞，涂抹在瓊脂平板上；1個小時后，倒置平板，在37攝氏度的條件下培養15小時，即得。用移液槍懸浮細胞之前需要保留上清液。最后用滅過菌的竹棒挑取目標質粒。。?

以上所述，僅為本發明較佳的具體實施方式，但本發明的保護范圍并不局限于此，任何熟悉本技術領域的技術人員在本發明披露的技術范圍內，根據本發明的技術方案及其發明構思加以等同替換或改變，都應涵蓋在本發明的保護范圍之內。?