[發明專利]哈茨木霉厚垣孢子的生產方法

有效

• 申請號: 201310533343.X
• 申請日: 2013-10-31
• 公開（公告）號: CN103525748A
• 公開（公告）日: 2014-01-22
• 發明（設計）人: 豐來;羅志威;郭帥;呂黎;粟靜;嚴征
• 申請（專利權）人: 湖南泰谷生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12N3/00
• 分類號: C12N3/00;C12R1/885
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

技術領域

本發明涉及微生物發酵領域，具體地說，涉及哈茨木霉厚垣孢子的生產方法。

背景技術

木霉菌（Trichoderma?spp.）屬真菌門，半知菌亞門，絲孢綱，叢梗孢目，粘孢菌類，是一類普遍存在的真菌，常見于土壤中，是土壤微生物的重要群落。木霉屬真菌廣泛分布于自然界，廣泛存在于腐木、種籽、植物殘體、空氣中，可從中分離得到。

木霉菌具有重要的經濟意義，被廣泛地應用到農業的各個方面，如防治植物病害、促進植物生長、生物修復土壤和環境、應用于生物有機肥等。近些年，木霉菌的研究與應用得到了快速發展。結合遺傳學、分子生物學、生物化學及生態學等研究方法，木霉菌及其代謝產物在促進植物生長，增加營養物質的吸收利用率，提高農作物的產量，以及增強對病害的防御性方面有著廣闊的應用前景。特別是在倡導綠色農業的背景下，木霉菌的大面積推廣應用已成為構建現代和高效的生物防治病蟲害體系中不可或缺的一部分。

隨著社會的進步，人們越來越深刻地認識到長期大量使用化學農藥對生態環境和人類健康的危害。生物防治可以有效地克服這些弊端,因而生物農藥逐漸受到人們的重視。其中拮抗微生物在植病生防中的應用倍受人們關注。在2013年已發現的拮抗微生物中，木霉菌具有很好的生防活性。

木霉屬中應用最多的是哈茨木霉（Trichoderma?harzianum）。目前，木霉真菌應用于農業方面大都是采用分生孢子制劑，但分生孢子制劑存在自身的缺陷。分生孢子貨架期比較短，一般只有2到3個月左右，夏季更短，而且分生孢子抗逆能力低，這不利于哈茨木霉應用于農業方面。厚垣孢子具有耐干燥、耐低溫、存活期長等優點，可使孢子易于加工和貯存，有利于在土壤中存活。

發明內容

本發明的目的是提供一種高產哈茨木霉厚垣孢子的方法。

為了實現本發明目的，本發明的一種哈茨木霉厚垣孢子的生產方法，包括哈茨木霉菌種活化、一級液體種子液的制備、二級液體種子液的制備以及固體發酵的步驟。

其中，用于固體發酵生產哈茨木霉厚垣孢子的培養基，包括如下重量份的各組分：玉米秸稈粉3-4.5、豆粕粉0.75-1.5和無機鹽離子溶液4-6.25。其中，所述無機鹽離子溶液中各成分的質量百分數為：硫酸銨0.5%-2%、氯化鈉0.01%-1.5%、磷酸二氫鉀0.1%-1.5%、硫酸鎂0.1%-1.5%、硫酸錳0.1%-1.5%、硫酸亞鐵0.01%-0.1%、蛋白胨0.05%-1.5%、葡萄糖0.05%-1.5%，余量為水。

優選地，用于固體發酵生產哈茨木霉厚垣孢子的培養基，包括如下重量份的各組分：玉米秸稈粉3.4-4.2、豆粕粉0.85-1.2和無機鹽離子溶液4.2-5.8。其中，所述無機鹽離子溶液中各成分的質量百分數為：硫酸銨0.7%-1.5%、氯化鈉0.5%-1.2%、磷酸二氫鉀0.3%-0.9%、硫酸鎂0.2%-1.2%、硫酸錳0.2%-1.2%、硫酸亞鐵0.04%-0.08%、蛋白胨0.2%-1.2%、葡萄糖0.5%-1.2%，余量為水。

更優選地，用于固體發酵生產哈茨木霉厚垣孢子的培養基，包括如下重量份的各組分：玉米秸稈粉3.6、豆粕粉1和無機鹽離子溶液5.4。其中，所述無機鹽離子溶液中各成分的質量百分數為：硫酸銨1.2%、氯化鈉1%、磷酸二氫鉀0.5%、硫酸鎂1%、硫酸錳1%、硫酸亞鐵0.05%、蛋白胨1%、葡萄糖1%，余量為水。

固體發酵的方法為：將二級液體種子液按10%-15%（優選15%）的接種量接種至上述用于固體發酵生產哈茨木霉厚垣孢子的培養基中，于25℃-35℃，通氣量2.5L/min，相對濕度保持在80%以上的條件下，進行暗培養10-15天，每隔2-3天翻動1次培養基。

前述方法中，一級液體種子液的制備方法為：將活化后的哈茨木霉接種于斜面種子液體活化培養基中，于28℃發酵培養4天，即得一級液體種子液。其中，所述斜面種子液體活化培養基中各成分的質量百分數為：硫酸銨1.5%、葡萄糖1.2%和吐溫800.2%，余量為水。

前述方法中，二級液體種子液的制備方法為：將一級液體種子液按9%的接種量接種至哈茨木霉的液體發酵培養基中，于30℃，通氣量2.5L/min，轉速150r/min，pH值6.0的條件下，發酵培養3天，即得二級液體種子液。其中，哈茨木霉的液體發酵培養基的配方為：麩皮15g/L、玉米粉7g/L、硫酸銨4g/L、硫酸鎂4g/L、磷酸二氫鈉4g/L、磷酸氫二鈉4g/L和泡敵0.3g/L，以水配制。