[發明專利]一種水櫟組織培養繁殖方法

有效

• 申請號: 201310519136.9
• 申請日: 2013-10-29
• 公開（公告）號: CN103535280A
• 公開（公告）日: 2014-01-29
• 發明（設計）人: 黃利斌;張敏;陳智敏;竇全琴;董筱昀
• 申請（專利權）人: 江蘇省林業科學研究院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 肖念

1.一種水櫟組織培養繁殖方法，其特征在于：包括以下步驟：

（1）選材：于十月末在引種的十年生水櫟樹上采集種子，采用水浸法除去壞種子，將選出的種子置于沙、蔬菜顆粒肥、蘆葦炭、草碳混合物的基質中培養，取水櫟種子繁育的優良實生幼苗嫩莖為接種材料；所述沙、蔬菜顆粒肥、蘆葦炭、草碳混合物體積比為4:1:1:1；

（2）消毒處理：將幼苗嫩莖進行消毒處理；

（3）試管芽苗培養：在無菌條件下，將步驟（2）中消毒后的外植體剪去接觸消毒液的傷口，留1~2cm帶芽莖段接種在經消毒的含有啟動培養基的玻璃培養瓶中，然后將其置于普通日光燈為光源的環境下，濕度為50%~65%，培養22~25天，分化長成試管芽苗；所述啟動培養基配方為：WPM基本培養基、0.01?mg.?L^-16-BA、0.02mg.?L^-1NAA、30g.L^-1蔗糖、6.5?g.L^-1卡拉膠；所述啟動培養基的pH值控制在5.7~5.8；

（4）壯苗培養：將步驟（3）中獲得的試管芽苗，剪切帶有1~2個腋芽的莖段或頂芽后，轉接于經消毒的含有壯苗培養基的玻璃培養瓶中，濕度為50%~65%的條件下，進行壯苗培養，15~18天后進入下一步驟；所述壯苗培養基配方為：WPM基本培養基、0.01mg.?L^-16-BA、0.02?mg.?L^-1NAA、0.5?mg.?L^-1玉米素、30g.L^-1蔗糖、6.5?g.L^-1卡拉膠；所述壯苗培養基配方pH值控制在5.7~5.8；

（5）增殖培養：將從步驟（4）中長成的試管芽苗，剪切帶有1~2個腋芽的莖段或頂芽后，轉接于增殖培養基中，濕度50%~65%；增殖培養15~20天；所述增殖培養基配方為：WPM基本培養基、0.?1mg.?L^-16-BA、?0.02?mg.?L^-1NAA、?30g.L^-1蔗糖、6.5?g.L^-1卡拉膠；增殖培養基pH值控制在5.7~5.8；

（6）生根培養：將步驟（5）中獲得的試管苗，去掉基部組織和部分葉片，留3~4片葉片，在無菌條件下，接種于經消毒的含有生根培養基的玻璃培養瓶中，在光照強度為1600~2500lx，每日光照時間為16小時，溫度為(25±2)℃，濕度為50%~65%的條件下，進行生根培養15天后轉至不含激素的WPM培養基中繼續培養15~20天；所述生根培養基配方為：WPM基本培養基、1.5mg.L^-1IBA、30g.L^-1蔗糖、6.5?g.L^-1卡拉膠，所述生根培養基的pH值為5.7~5.8；

（7）移栽、成活：將步驟（6）中獲得的生根瓶苗，取出洗凈，移栽到含有泥炭和黃心土的基質中，然后澆透水，用塑料薄膜覆蓋容器口，保持溫度25~30?℃，相對濕度75%~85%，培養30~35天。

2.根據權利要求1所述的水櫟組織培養繁殖方法，其特征在于：所述步驟（3）、步驟（4）、步驟（5）、步驟（6）中的培養條件為：光照強度為1600~2500lx，每日光照時間為16h，溫度為(25±2)℃。

3.根據權利要求1所述的水櫟組織培養繁殖方法，其特征在于：所述步驟(2)中的消毒處理過程包括：選取的外植體剪切成3~4cm長的小段，用洗衣粉溶液浸泡5?min，自來水沖洗10次，轉入超凈工作臺，放入無菌燒杯中，用70%的酒精進行表面消毒30?s，無菌水沖洗3?次，再用濃度為0.1%的升汞溶液消毒4.5分鐘，最后用無菌水沖洗6次。

4.根據權利要求1或2所述的水櫟組織培養繁殖方法，其特征在于：所述步驟（7）中的泥炭與黃心土的體積比為1:1~1:1.5。

5.根據權利要求1~4所述的水櫟組織培養繁殖方法，其特征在于：所述的WPM基本培養基即木本植物組織培養基的具體配方如下：

硝酸銨NH4NO3?????????????400?mg/L

?硝酸鈣?Ca(NO₃)₂·4H₂O???????556?mg/L

氯化鈣CaCl₂·2H₂O???????????96?mg/L

硫酸鎂MgSO₄·7H₂O??????????370?mg/L

磷酸二氫鉀?KH₂PO_{4?????????????}?170?mg/L

硫酸鉀K₂SO4????????????????990?mg/L

乙二胺四乙酸二鈉Na₂·EDTA???37.3?mg/L

硫酸亞鐵FeSO₄·7H₂O?????????27.8?mg/L

硫酸錳MnSO₄·H₂O???????????22.3?mg/L

硫酸鋅ZnSO₄·7H₂O???????????8.6?mg/L

硼酸H₃BO_{3?????????????????????????}?6.2?mg/L

鉬酸鈉Na₂MoO₄·2H₂O????????0.25?mg/L

硫酸銅CuSO₄·5H₂O??????????0.025?mg/L

氯化鈷?CoCl₂.6?H₂O_{????????????????}0.025?mg/L

肌醇C₆H₁₂O₆·2H₂O???????????100?mg/L

甘氨酸??NH_2·CH₂·COOH??????2?mg/L

鹽酸硫胺素C₁₂H₁₇ClOS·2HCl???1?mg/L

鹽酸吡哆醇C₈H₁₀NO₅P?????????0.5?mg/L

煙酸NC₅H₄COOH????????????0.5?mg/L　。