[發明專利]四糖MAG拮抗劑的合成方法

有效

• 申請號: 201310508204.1
• 申請日: 2013-10-24
• 公開（公告）號: CN103525888A
• 公開（公告）日: 2014-01-22
• 發明（設計）人: 曹鴻志;王鳳山;孟欣
• 申請（專利權）人: 山東大學
• 主分類號: C12P19/26
• 分類號: C12P19/26;C12P19/18;C07H15/04;C07H1/00
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 彭成

1.四糖MAG拮抗劑的合成方法，其特征在于：所述步驟如下：

（1）利用化學法合成β-構型的N-乙酰半乳糖胺，結構如通式Ⅰ所示，其中：R¹為氫原子、α-或β-構型絲氨酸殘基、α-或β-構型蘇氨酸殘基、疊氮取代烷基、炔基取代烷基、巰基取代烷基或α-或β-構型取代烷基；

（2）利用“一鍋雙酶法”將通式Ⅰ和半乳糖立體選擇性偶聯合成二糖Galβ(l-3)GalNAcOR¹，結構如通式Ⅱ所示，所述“一鍋雙酶法”中先后用到的酶分別為半乳糖激酶和己糖磷酸化酶；其中：R¹為氫原子、α-或β-構型絲氨酸殘基、α-或β-構型蘇氨酸殘基、疊氮取代烷基、炔基取代烷基、巰基取代烷基或α-或β-構型取代烷基；

（3）利用“一鍋雙酶法”合成三糖，結構如通式Ⅲ所示，所述“一鍋雙酶法”唾液酸化中用到的酶指CMP-唾液酸合成酶和α2,3唾液酸轉移酶；其中：R¹為氫原子、α-或β-構型絲氨酸殘基、α-或β-構型蘇氨酸殘基、疊氮取代烷基、炔基取代烷基、巰基取代烷基或α-或β-構型取代烷基；R²為氟原子、氮乙酰氨基、氮羥基乙酰氨基、氮疊氮乙酰氨基、羥基或疊氮；R³為氟原子、氮乙酰氨基、氮羥基乙酰氨基、氮疊氮乙酰氨基、羥基或疊氮；

（4）利用乙酰化和選擇性脫乙?；姆椒?，合成含唾液酸衍生物的內酯三糖，結構如通式Ⅳ所示；其中：R¹為氫原子、α-或β-構型絲氨酸殘基、α-或β-構型蘇氨酸殘基、疊氮取代烷基、炔基取代烷基、巰基取代烷基或α-或β-構型取代烷基；R²為氟原子、氮乙酰氨基、氮羥基乙酰氨基、氮疊氮乙酰氨基、羥基或疊氮；R³為氟原子、氮乙酰氨基、氮羥基乙酰氨基、氮疊氮乙酰氨基、羥基或疊氮；

（5）利用酶法合成內酯四糖，所述酶法唾液酸化中用到的酶指α2,6唾液酸轉移酶，結構如通式Ⅴ所示；其中：R¹為氫原子、α-或β-構型絲氨酸殘基、α-或β-構型蘇氨酸殘基、疊氮取代烷基、炔基取代烷基、巰基取代烷基或α-或β-構型取代烷基；R²為氟原子、氮乙酰氨基、氮羥基乙酰氨基、氮疊氮乙酰氨基、羥基或疊氮；R³為氟原子、氮乙酰氨基、氮羥基乙酰氨基、氮疊氮乙酰氨基、羥基或疊氮；R⁴為氟原子、氮乙酰氨基、氮羥基乙酰氨基、氮疊氮乙酰氨基、羥基或疊氮；R⁵為氟原子、氮乙酰氨基、氮羥基乙酰氨基、氮疊氮乙酰氨基、羥基或疊氮；

（6）堿性水溶液中水解上述雙唾液酸化四糖的內酯，得到四糖MAG拮抗劑，結構如通式Ⅵ所示；其中：R¹為氫原子、α-或β-構型絲氨酸殘基、α-或β-構型蘇氨酸殘基、疊氮取代烷基、炔基取代烷基、巰基取代烷基或α-或β-構型取代烷基；R²為氟原子、氮乙酰氨基、氮羥基乙酰氨基、氮疊氮乙酰氨基、羥基或疊氮；R³為氟原子、氮乙酰氨基、氮羥基乙酰氨基、氮疊氮乙酰氨基、羥基或疊氮；R⁴為氟原子、氮乙酰氨基、氮羥基乙酰氨基、氮疊氮乙酰氨基、羥基或疊氮；R⁵為氟原子、氮乙酰氨基、氮羥基乙酰氨基、氮疊氮乙酰氨基、羥基或疊氮。

2.根據權利要求1所述的四糖MAG拮抗劑的合成方法，其特征在于：所述步驟（1）中的β-構型的N-乙酰半乳糖胺采用以下方法合成：將半乳糖氨鹽酸鹽與醋酐進行反應后，將其全部羥基用乙酰基保護；然后在微波條件下進行β-構型糖苷化反應，然后依次疊氮化和脫保護后即得。

3.根據權利要求1所述的四糖MAG拮抗劑的合成方法，其特征在于：所述步驟（2）中的二糖Galβ(l-3)GalNAcΟR¹合成方法是：將化合物Ⅰ、半乳糖(1.5-3.0當量)、腺嘌呤核苷三磷酸(1.5-5.0當量)、MgCl₂(5-100mmol)、Tris-HCl緩沖液(10-500mmol,pH5.0-10.0)配制水溶液，然后將反應體系的pH值調節至4.5-8.5，然后添加半乳糖激酶和己糖磷酸化酶，待反應完成后，純化即可直接獲得二糖化合物Ⅱ。