[發(fā)明專利]一種高產(chǎn)型烏膚雞品系的培育方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310507256.7
• 申請(qǐng)日: 2013-10-24
• 公開（公告）號(hào): CN103563849A
• 公開（公告）日: 2014-02-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 康相濤;田亞東;楊朋坤;韓瑞麗;王丹丹;李轉(zhuǎn)見;孫桂榮;蔣瑞瑞;呂世杰;閆峰賓;王彥彬;劉小軍;李國(guó)喜;黃艷群;郭晗;許殿明;李孝法;索智勇
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 河南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): A01K67/027
• 分類號(hào): A01K67/027
• 代理公司: 鄭州睿信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 41119
• 代理人: 牛愛周

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明具體涉及一種高產(chǎn)型烏膚雞品系的培育方法，屬于分子育種技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

烏骨雞是聞名中外的藥用家禽，1874年被國(guó)際上承認(rèn)為標(biāo)準(zhǔn)品種，烏雞肉和烏雞蛋具有特殊的藥用、營(yíng)養(yǎng)及觀賞價(jià)值。但烏雞的產(chǎn)蛋性能低下。而國(guó)外的高產(chǎn)蛋雞的產(chǎn)蛋性能非常好。為了提高其生產(chǎn)性能，育種工作者在育種實(shí)踐中往往要導(dǎo)入高產(chǎn)蛋雞的血緣，這就會(huì)使得烏膚性狀發(fā)生分離，進(jìn)而影響淘汰母雞的價(jià)格。為了能夠在提供生產(chǎn)性能的同時(shí)又保持淘汰母雞的烏膚性狀，烏膚位點(diǎn)基因型的判定就顯得非常重要。傳統(tǒng)育種中常常采用測(cè)交的方法，依據(jù)雜交后代雞的表型性狀留種。即通過測(cè)交、繁殖擴(kuò)群來淘汰烏膚雞群體里的烏膚雜合子個(gè)體。但是測(cè)交過程較為繁瑣，周期長(zhǎng)，且會(huì)受到擴(kuò)群的大小的影響。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種高產(chǎn)型烏膚雞品系的培育方法。

為了實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：

一種高產(chǎn)型烏膚雞品系的培育方法，包括以下步驟：

（1）利用烏膚雞品種作為父本與高產(chǎn)蛋雞品種作為母本進(jìn)行雜交，生產(chǎn)出F1代雞；

（2）F1代自交得到F2代，選留F2代烏膚雞；

（3）利用熒光定量PCR測(cè)定F2代烏膚雞EDN3基因的相對(duì)拷貝數(shù)，確定F2代烏膚雞個(gè)體的基因型，選留烏膚位點(diǎn)為FmFm基因型的個(gè)體，淘汰烏膚位點(diǎn)為Fmfm基因型的個(gè)體，得到烏膚位點(diǎn)為FmFm基因型的公母雞；

（4）對(duì)得到的FmFm基因型個(gè)體進(jìn)行橫交和擴(kuò)繁，按照家系選擇和個(gè)體選擇方法，提高產(chǎn)蛋量，同時(shí)提純和固定烏膚性狀，經(jīng)過4個(gè)世代以上的選育后，得到烏膚位點(diǎn)為FmFm基因型的高產(chǎn)型烏膚雞品系。

所述步驟（1）中的烏膚雞品種為絲羽烏骨雞、江山烏骨雞、金湖烏鳳雞、余干烏骨雞、鄖陽烏骨雞、雪峰烏骨雞、四川山地烏骨雞、烏蒙烏骨雞、騰沖雪雞、略陽雞（黑河烏雞）、他留烏骨雞、無量山烏骨雞、鹽津?yàn)豕请u等。

所述步驟（1）中的高產(chǎn)蛋雞品種為白來航、羅曼、海蘭、海賽克斯、尼克、巴布考克、黑康、特佳、雪佛、伊莎、京紅、京粉、河北大午、農(nóng)大3號(hào)、新楊褐、新楊白等。

所述步驟（3）中利用熒光定量PCR測(cè)定F2代烏膚雞EDN3基因的相對(duì)拷貝數(shù)，確定F2代烏膚雞個(gè)體基因型的方法，包括以下步驟：以包含EDN3基因的待測(cè)雞全血基因組DNA為模板，以引物對(duì)P為引物進(jìn)行熒光定量PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增片段的DNA序列如SEQ?IDNo.3所示；

所述的引物對(duì)P為：

上游引物P-F：5’-CTTGACTTTTGGGATTTACCT-3’（如SEQ?ID?No.1所示），

下游引物P-R：5’-ACTGGTGCAGTATTTTCTGTT-3’（如SEQ?ID?No.2所示）。

該擴(kuò)增序列的全長(zhǎng)為134bp，位于雞烏膚位點(diǎn)EDN3基因上，能夠檢測(cè)雞烏膚基因位點(diǎn)EDN3基因是否存在拷貝數(shù)變異。

所述的熒光定量PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系為：熒光定量PCR2×緩沖液10μL，ddH₂O7μL，P-F0.5μL，P-R0.5μL，DNA模板2μL。

所述的熒光定量PCR2×緩沖液主要包括5U/μL?Taq?DNA?Polymerase，10×Buffer，25mM?MgCl₂，2mM?dNTPs，SYBR?Green?I。

所述的熒光定量PCR擴(kuò)增反應(yīng)程序?yàn)椋?5℃預(yù)變性2min；40個(gè)循環(huán)：95℃變性30s，57℃退火30s，72℃延伸30s；72℃延伸10min；20℃保存。

具體的，所述步驟（3）中利用熒光定量PCR測(cè)定F2代烏膚雞EDN3基因的相對(duì)拷貝數(shù)，確定F2代烏膚雞個(gè)體基因型的方法，還包括以下步驟：利用標(biāo)準(zhǔn)曲線求得待測(cè)雞EDN3基因的相對(duì)拷貝數(shù)，根據(jù)其相對(duì)拷貝數(shù)鑒定雞烏膚位點(diǎn)的基因型。

所述的標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作方法為：以白膚雞全血基因組DNA作為熒光定量標(biāo)準(zhǔn)品，濃度分別為80，40，20，10，5，2.5ng/μL，以引物對(duì)P為引物進(jìn)行熒光定量PCR擴(kuò)增，以上述六個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的Ct值為縱坐標(biāo)，以濃度的對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。

所述的利用標(biāo)準(zhǔn)曲線求得待測(cè)雞EDN3基因的相對(duì)拷貝數(shù)的方法為：熒光定量PCR擴(kuò)增前，先將待測(cè)雞的DNA稀釋到同一濃度10ng/μL，再將待測(cè)雞的Ct值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程中，求出其對(duì)應(yīng)的對(duì)數(shù)濃度，再轉(zhuǎn)化為濃度，即為該待測(cè)雞EDN3基因的相對(duì)拷貝數(shù)。