[發明專利]一種從牡丹花中提取總黃酮的方法

有效

• 申請號: 201310506060.6
• 申請日: 2013-10-24
• 公開（公告）號: CN103520301A
• 公開（公告）日: 2014-01-22
• 發明（設計）人: 詹鎰萌;馬明;羅娟
• 申請（專利權）人: 洛陽祥和牡丹科技有限公司
• 主分類號: A61K36/71
• 分類號: A61K36/71;A61P15/00;A61P7/02;A61K133/00
• 代理公司: 洛陽公信知識產權事務所(普通合伙) 41120
• 代理人: 張燕

技術領域

本發明屬于植物生物技術領域，具體涉及一種從牡丹花中提取總黃酮的方法。

背景技術

總黃酮是黃酮類化合物的總稱，具有抗氧化清除自由基、擴張心血管、微量的雌激素樣作用，也可降低前列腺癌、結腸癌等癌癥以及心肌梗阻死，動脈粥硬化等疾病的發病率和死亡率。同時，黃酮類化合物也是重要的功能食品添加劑、飼料添加劑、天然抗氧化劑、具有保鮮盒護膚美容作用。因此，黃酮類化合物對防治疾病及健康有積極作用，具有廣闊的市場潛力。

牡丹屬毛茛科芍藥屬灌木，又有洛陽花、富貴花和“花中之王”之美稱。牡丹除了其根皮是一種重要的中藥外，花也具有重要的藥用價值，有調經活血的功效。黃酮類化合物是花的重要活性成分，因此研究一種快速、高效的從牡丹花中提取牡丹花中總黃酮化合物的方法具有重要意義。

目前常用的從牡丹花中提取總黃酮化合物的方法有兩種。一種是酶法提取，另一種是超聲波提取。酶法提取作用時間長，浪費工作時間，且要求長時間保持較高的溫度條件，浪費能源，不利于大規模生產。超聲波提取可以在常溫下進行，萃取率高，能耗低，但是當樣品量大時，到達樣品內部的超聲波能量衰減嚴重，提取效果差，且樣品用量多時，堆積厚度增大，試劑對樣品內部的浸提作用就不充分，影響提取效果，而且超聲波提取對提取瓶的厚度和提取瓶放置位置要求較高，影響提取效果。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術中的缺點，提供一種從牡丹花中提取總黃酮的方法，能夠快速、高效的從牡丹花中提取牡丹花中總黃酮化合物。

本發明所采取的技術方案是，一種從牡丹花中提取總黃酮的方法，包括以下步驟：

步驟一、采摘成熟、無病害的牡丹花，將牡丹花置于溫度為25～30℃的烘箱中鼓風干燥，之后取出牡丹花并粉碎至40目，備用；

步驟二、將質量濃度為0.2mg/mL的纖維素酶水溶液和質量濃度為0.1mg/mL的果膠酶水溶液等體積混合，向混合液中加入質量百分比濃度為2%的醋酸溶液，直至混合液pH值達到5.0，將混合液攪拌均勻后靜置10～15min，得到復合酶液；

步驟三、將步驟一得到的牡丹花放入三角瓶中，在三角瓶中加入步驟二制備的復合酶液，復合酶液與牡丹花加入量的比例為45:1，其中復合酶液以毫升計，牡丹花以克計，之后先將帶有牡丹花的三角瓶放置到溫度為35℃的條件下靜置20min，然后保持該溫度，并三角瓶施加頻率為22?kHz的超聲波處理5min，最后將三角瓶轉移到溫度為40℃的條件下靜置40min，備用；

步驟四、向靜置后的三角瓶中加入質量百分比濃度為95%的乙醇回流提取1h，乙醇加入量為三角瓶中溶液的5倍，之后將溶液轉移到轉速為10000r/min的離心機中離心15min，得到上清液Ⅰ，向離心后的殘渣中加入質量百分比濃度為60%的乙醇回流提取0.5h，之后轉移到轉速為10000r/min的離心機中離心，得到上清液Ⅱ；

步驟五、合并上清液Ⅰ和上清液Ⅱ后，轉入壓強為-0.1MPA，溫度為55~65℃的旋轉蒸發儀中減壓濃縮，濃縮至溫度為55℃的條件下相對密度為1.20g/mL。

本發明的有益效果有以下幾個方面：

一、先在溫度為35℃的條件下對牡丹花酶處理20min，可以使牡丹花細胞壁及其間質結構產生局部的疏松、膨脹、崩潰等變化；之后對牡丹花施加短時間的超聲波處理，超聲波在液體的內部產生強的沖擊波和微射流，這種強大的沖擊流能夠有效的減小、消除溶劑與水相之間的阻滯層，從而加大了傳質速率，此外，沖擊流對細胞組織產生一種物理剪切力，使之變形、破裂，并釋放出內含物，在細胞壁及其間質結構產生局部的疏松、膨脹、這大大加速了細胞內黃酮類化合物的萃取過程，起到了事半功倍的效果；超聲波處理后，將牡丹花轉移到溫度為40℃的條件下繼續酶解40min，可以使細胞壁及其間質徹底崩潰，大大提高了牡丹花細胞內總黃酮的提取率，可以達到95.6%。

二、本發明中的超聲波頻率僅為22kHz，可以使纖維素酶和果膠酶的活性中心發生移動，使疏水性增強，促進酶解反應時與底物更好的結合，促進牡丹花細胞壁及其間質結構更快的崩潰，使細胞內的黃酮類化合物更快的進入溶劑中。

三、本發明通過采取以酶提取為主、超聲波提取為輔的方法，避免了使用超聲波提取樣品量大時，到達樣品內部的超聲波能量衰減嚴重，提取效果差的問題。