[發明專利]一種乳鐵蛋白修飾固體脂質納米粒及其制備方法和應用

無效

• 申請號: 201310499991.8
• 申請日: 2013-10-22
• 公開（公告）號: CN103585639A
• 公開（公告）日: 2014-02-19
• 發明（設計）人: 葛曉群;郭榮;高緯康;趙宇蕾;呂丹;顏玉文;鞠婧婧
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: A61K47/42
• 分類號: A61K47/42;A61K9/51;A61P29/00;A61K31/451;A61K31/37
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 盧亞麗

技術領域

本發明屬于醫藥技術領域，具體涉及一種乳鐵蛋白修飾固體脂質納米粒及其制備方法和應用。?

背景技術

血腦屏障(blood-brain?barrier，BBB)，可以防止血液中的有害物質進入腦內，同時又可將腦內有害或過剩物質排出體外，從而保持腦的內環境穩定，保障了大腦的正常功能，對中樞神經系統（central?nervous?system，CNS）起到了很好的保護作用。但BBB的存在，使98%的小分子化學藥物和幾乎所有的大分子藥物，包括蛋白質與多肽以及基因藥物都無法進入腦內，或難以在腦內達到有效濃度，使得腦部疾病的治療極為困難。?

在過去的研究中，學者們已經提出了一些方法來改善大腦藥物的攝入：如制備前體藥物，開放血腦屏障的緊密連接，使用載體系統如抗體、脂質體、納米粒等，其中，納米藥物載體受到人們的關注。納米藥物載體是指溶解或分散有藥物的各種納米乳、納米粒、納米脂質體和納米藥物微粒等。采用納米技術制備的納米粒，具有小尺寸效應、表面效應和界面效應等特性。大分子藥物與納米藥物載體制備形成的納米粒易于通過BBB，靶向于腦組織。而且將納米粒表面進行修飾后可避免網狀內皮系統的吞噬，發揮腦靶向作用。納米粒常用的修飾材料有聚乙二醇（PEG）、泊洛沙姆及其乙二胺衍生物、多糖等親水性聚合物以及受體介導的腦靶向功能分子。腦靶向給藥載體分為聚合物納米粒、脂質體、受體介導轉運載體、吸附介導轉運載體、基因載體、內源性物質載體等。?

受體介導的轉運載體是將腦靶向功能分子（亦稱配體）通過不同的方法連接到已包裹藥物的納米粒上，如葉酸、低密度脂蛋白（LDL）、載脂蛋白E、載脂蛋白A-I、轉鐵蛋白、胰島素等。經過這些配體修飾的納米粒進入體內后，可與血腦屏障上相應的受體相結合而被轉運入腦，實現腦靶向給藥目的。研究表明，這種受體介導的轉運載體能夠提高藥物的腦靶向性。?

乳鐵蛋白(Lactoferrin，Lf)是一種存在于哺乳動物體內的陽離子糖蛋白，屬于轉鐵蛋白家族。己有研究證實Lf可以通過受體介導的胞吞轉運入腦。與轉鐵蛋白相比，血漿中內源性Lf含量較低，它在血腦屏障的轉運為單向轉運，無明顯的跨細胞降解現象。鑒于以上特點，近幾年來有學者應用Lf作為靶向功能分子修飾納米粒，如用Lf修飾聚合物（PLGA,PLA）納米粒、聚合物泡囊及陽離子脂質體。?

固體脂質納米粒（solid?lipid?nanoparticles,SLN）是以固態的天然或合成的類脂為載體,將藥物包裹于類脂核中,經不同方法制成的粒徑在50-l000nm之間的固態膠粒給藥系統。?SLN既有脂質體的生理相容性和耐受性好的優點,又有聚合物納米粒的緩釋和良好的靶向性。然而SLN的靶向性是一種被動靶向。由于SLN是以脂質為基質的，而絕大多數脂質類化合物結構缺乏活性基團,不像聚合物容易進行表面修飾，因此連接蛋白類的靶向功能分子比較困難，故其主動靶向的報道很少，受體介導的腦靶向目前尚未見報道。?

發明內容

本發明的目的是提供一種乳鐵蛋白作為靶向功能分子構建固體脂質納米粒（Lf-SLN）的制備方法，采用該方法制備而得的Lf-SLN具有良好的粒徑和Zeta電位，具有良好的穩定性。?

一種乳鐵蛋白修飾固體脂質納米粒，包括固體脂質納米粒，固體脂質納米粒表面修飾有乳鐵蛋白。?

本發明的乳鐵蛋白修飾固體脂質納米粒可作為藥物轉運載體，在固體脂質納米粒內包裹有藥物。?

本發明所述的乳鐵蛋白修飾固體脂質納米粒，通過下述方法制得：先通過N，N’-二環己基碳二亞胺（DCC）脫水反應合成馬來酸酐-6-氨基己酸-聚乙二醇單硬脂肪酸酯（mal-sac-PEG-MS）。再用馬來酸酐-6-氨基己酸-聚乙二醇單硬脂肪酸酯制得納米混懸液；然后通過Traut's試劑進行乳鐵蛋白巰基化（Lf-SH），最佳反應比例為Lf：Traut's=1：40（摩爾比），在納米粒混懸液中加入Lf-SH，室溫攪拌進行蛋白修飾，最佳反應條件500：1(質量比)。?

具體地，一種乳鐵蛋白修飾固體脂質納米粒制備方法，依次包括以下步驟：?

1）馬來酸酐-6-氨基己酸（mal-sac）以二氯甲烷作為溶劑，加入1/3mal-sac摩爾量的聚乙二醇單硬脂肪酸酯（PEG-MS），冰浴條件下，依次加入4-二甲氨基吡啶（DMAP）和DCC，室溫攪拌反應，薄層色譜(TLC)分析確定反應終點，乙醚沉淀，甲醇重結晶，低溫條件下得馬來酸酐-6-氨基己酸-聚乙二醇單硬脂肪酸酯（mal-sac-PEG-MS）。?

合成路線如下所示：?