[發明專利]一種乳鐵蛋白修飾固體脂質納米粒及其制備方法和應用

無效

• 申請號: 201310499991.8
• 申請日: 2013-10-22
• 公開（公告）號: CN103585639A
• 公開（公告）日: 2014-02-19
• 發明（設計）人: 葛曉群;郭榮;高緯康;趙宇蕾;呂丹;顏玉文;鞠婧婧
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: A61K47/42
• 分類號: A61K47/42;A61K9/51;A61P29/00;A61K31/451;A61K31/37
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 盧亞麗

1.一種乳鐵蛋白修飾固體脂質納米粒，包括固體脂質納米粒，其特征在于所述固體脂質納米粒表面修飾有乳鐵蛋白。

2.根據權利要求1所述的乳鐵蛋白修飾固體脂質納米粒，其特征在于，在固體脂質納米粒內包裹有藥物。

3.一種制備權利要求1所述乳鐵蛋白修飾固體脂質納米粒的方法，是：先通過N，N’-二環己基碳二亞胺脫水反應合成馬來酸酐-6-氨基己酸-聚乙二醇單硬脂肪酸酯；再用馬來酸酐-6-氨基己酸-聚乙二醇單硬脂肪酸酯制得納米混懸液；然后通過Traut's試劑進行乳鐵蛋白巰基化，在納米粒混懸液中加入巰基化乳鐵蛋白，室溫攪拌進行蛋白修飾。

4.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）馬來酸酐-6-氨基己酸-聚乙二醇單硬脂肪酸酯的合成

馬來酸酐-6-氨基己酸以二氯甲烷作為溶劑，加入1/3馬來酸酐-6-氨基己酸摩爾量的聚乙二醇單硬脂肪酸酯，冰浴條件下，依次加入4-二甲氨基吡啶和N，N’-二環己基碳二亞胺，室溫攪拌反應，薄層色譜分析確定反應終點，乙醚沉淀，甲醇重結晶，得馬來酸酐-6-氨基己酸-聚乙二醇單硬脂肪酸酯；

2）制備納米混懸液

稱取單硬脂酸甘油酯50mg、馬來酸酐-6-氨基己酸-聚乙二醇單硬脂肪酸酯0.5mg至一試管中，加熱、超聲溶解，作為油相；

稱取泊洛沙姆188100mg、大豆磷脂300mg，用水10ml溶解，作為水相；

將水相加入到油相，在75℃，18000r/min條件下高速攪拌10分鐘，然后在75℃水浴中超聲，置冰箱低溫固化，得納米混懸液；將此混懸液在超濾管中離心，濃縮至質量不再減少；

3)制備巰基化乳鐵蛋白

精密稱取1mg乳鐵蛋白，溶解于0.15mol/L的硼酸鈉溶液中，加入濃度lmg/mL的Traut's試劑，室溫低速攪拌lh，過Zeba脫鹽柱，除去小分子雜質，收集蛋白組分，得到巰基化乳鐵蛋白；

4)乳鐵蛋白修飾固體脂質納米粒

取濃縮后的納米混懸液0.5g，用2ml洗脫液A分散后移入小燒杯，加入巰基化乳鐵蛋白溶液，其中納米混懸液：巰基化乳鐵蛋白為1g：2mg，室溫攪拌反應9h，得到乳鐵蛋白修飾的納米混懸液；將該混懸液過瓊脂糖凝膠柱，以PBS為洗脫液，除去未連接的蛋白，收集具有乳光的組分，以PBS定容至10ml，即得到乳鐵蛋白修飾固體脂質納米粒。

5.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，步驟2）油相制備過程中加入有效劑量的藥物。

6.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述藥物是洛哌丁胺或香豆素6。

7.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，步驟3）中乳鐵蛋白與Traut's試劑的比例為摩爾比為1：40。

8.權利要求1所述的乳鐵蛋白修飾固體脂質納米粒作為藥物轉運載體的應用。