[發明專利]一種甘露聚糖酶及生產方法

有效

• 申請號: 201310490356.3
• 申請日: 2013-10-19
• 公開（公告）號: CN103540580A
• 公開（公告）日: 2014-01-29
• 發明（設計）人: 李忠興;楊忠義
• 申請（專利權）人: 沅江浣溪沙酶技術有限公司
• 主分類號: C12N9/42
• 分類號: C12N9/42;C12N9/24;C12R1/125
• 代理公司: 益陽市銀城專利事務所 43107
• 代理人: 舒斌

1.一種甘露聚糖酶的生產方法，其特征是它包括菌種培養、搖瓶發酵、酶液制備步驟，所述菌種即枯草芽孢桿菌（Bacillus?subtilis），實驗室編號為PARK9639，保藏號：CGMCC?NO：6226，其生物學特性為：革蘭氏染色陽性菌，產芽孢，菌體呈桿狀，單個細胞?0.7～0.8×2～3微米，周生鞭毛，能運動，以二分裂方式增殖；芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米橢圓位于菌體中央或稍偏，芽孢形成后菌體不膨大，在本發明所述培養基上菌落呈圓形，污白色、著色均勻，邊緣整齊，無光澤，黏稠。

2.根據權利要求1所述的一種甘露聚糖酶的生產方法，其特征是所述的菌種培養為CGMCC?NO：6226菌種在如下配制的斜面上生長良好，斜面培養基配方為：1000mL蒸餾水中，加入牛肉膏3g～8g，酵母膏3g～8g?，蛋白胨8g～12g，葡萄糖3g～5g?，氯化鈉3g～5g，調pH值6.9～7.1，0.1MPa滅菌28分鐘～32分鐘，制成試管斜面，接種該菌種，34℃～36℃，培養20小時～24小時后，放入5℃冰箱中備用，或向菌斜面上注入已滅菌液體石蠟后保藏或以脫脂牛奶為載體冷凍干燥真空封口保藏。

3.根據權利要求1所述的一種甘露聚糖酶的生產方法，其特征是所述的搖瓶發酵為CGMCC?NO：6226菌種在規定的培養條件下可產生高活力的甘露聚糖酶，這種培養條件是：以質量計，培養基配方為：魔芋粉3﹪～4﹪、麥麩2﹪～4﹪、氮含量40％的玉米漿0.5﹪～1﹪、酵母膏0.5﹪～1﹪，磷酸氫二銨0.2﹪～0.3﹪、磷酸氫二鉀0.02﹪～0.05﹪、蛋白胨0.1﹪～0.2﹪、硫酸鎂0.02﹪～0.05﹪、碳酸鈉0.20﹪～0.25﹪、水89.15﹪～93.46﹪，其中所述各組分之和為100﹪，滅菌前，調pH值為pH8.0～pH8.5，0.1MPa滅菌30分鐘～35分鐘，培養條件：32℃～37℃，搖床轉速260?r/min?～280r/min，培養34小時～42小時。

4.根據權利要求1所述的一種甘露聚糖酶的生產方法，其特征是所述的酶液制備為由茄瓶斜面制得細胞液體種子到種子罐，再到產酶發酵罐，二級發酵，制備標準化酶液。

5.根據權利要求4所述的一種甘露聚糖酶的生產方法，其特征是種子培養基配方為：以質量計，麥麩5﹪～6﹪、玉米粉1﹪～2﹪、氮含量40﹪的玉米漿1﹪～2﹪、氯化鈉0.4﹪～0.6﹪、碳酸鈉1﹪～2﹪、硫酸銨0.3﹪～0.5﹪、水86.9﹪～91.3﹪，其中所述各組分之和為100﹪，滅菌前，調pH值為6.5～7.0，0.1MPa滅菌30分鐘～35分鐘；種子罐裝料總體積不超過70﹪，培養條件為：溫度33℃～38℃，攪拌轉速180?r/min～220?r/min，通氣量以v/v?計：0小時～4小時，1：0.25?～0.27?，4小時～6小時，1:0.33?～0.36?，6小時以后，1:0.50?～0.55，罐壓0.06?MPa～0.07MPa，培養周期為7小時～9小時。

6.根據權利要求4所述的一種甘露聚糖酶的生產方法，其特征是產酶發酵罐的培養基配方為：以質量計，魔芋粉3﹪～4﹪、麥麩2﹪～4﹪、氮含量40％的玉米漿0.5﹪～1﹪、酵母膏0.5﹪～1﹪，磷酸氫二銨0.2﹪～0.3﹪、磷酸氫二鉀0.02﹪～0.05﹪、蛋白胨0.1﹪～0.2﹪、硫酸鎂0.02﹪～0.05﹪、碳酸鈉0.20﹪～0.25﹪、水89.15﹪～93.46﹪，其中所述各組分之和為100﹪，滅菌前，調pH值為8.0～8.5，0.1MPa滅菌30分鐘～35分鐘，裝料總體積不超過70﹪；培養條件：溫度33℃～38℃，攪拌轉速180?r/min～220?r/min，通氣量以v/v?計：0小時～4小時，1：0.30?～0.32?，4小時～6小時，1:0.40～0.42，6小時以后1:0.50～0.55，罐壓0.06?MPa～0.07MPa，發酵周期為34小時～42小時。

7.根據權利要求4所述的一種甘露聚糖酶的生產方法，其特征是在制備標準化酶液中，將產酶發酵罐的發酵醪液經過板框過濾、硅藻土除菌，經防腐處理得到在15℃密封存放三個月條件下，酶活力保持率為95﹪以上的標準甘露聚糖酶液。

8.根據權利要求7所述的一種甘露聚糖酶的生產方法，其特征是發酵醪液經板框過濾后，在發酵濾液中加入十二水合磷酸氫二鈉和二水合氯化鈣取雜除菌，其用量分別為發酵濾液質量的2.8﹪～3.5﹪和1.0﹪～1.3﹪。

9.一種根據權利要求1所述方法生產的甘露聚糖酶，其特征是所述甘露聚糖酶為堿性酶，不產纖維素酶，對結晶纖維素、羧甲基纖維素均沒有活性，在pH5.5～10.0、溫度40℃～60℃范圍內甘露聚糖酶活性穩定，最適范圍為pH6.0～8.0，溫度為45℃～55℃。