[發(fā)明專利]一種木聚糖酶及生產(chǎn)方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310490355.9
• 申請日: 2013-10-19
• 公開（公告）號: CN103571811A
• 公開（公告）日: 2014-02-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李忠興;楊忠義
• 申請（專利權(quán)）人: 沅江浣溪沙酶技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12N9/42
• 分類號: C12N9/42;C12N9/16;C12R1/07
• 代理公司: 益陽市銀城專利事務(wù)所 43107
• 代理人: 舒斌

1.一種木聚糖酶的生產(chǎn)方法，其特征是它包括菌種培養(yǎng)、搖瓶發(fā)酵、酶液制備步驟，所述菌種即沙福芽孢桿菌（Bacillus?safensis），實驗室編號為KERR89，保藏號：CGMCC?NO：5466，其生物學(xué)特性為：革蘭氏染色陽性菌，產(chǎn)芽孢，菌體呈短桿狀，單細(xì)胞直徑小于1um，以二分裂方式增殖；在本發(fā)明所述培養(yǎng)基上菌落呈圓形，白色、表面光滑，均一，邊緣整齊，略有光澤，黏稠。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種木聚糖酶的生產(chǎn)方法，其特征是所述的菌種培養(yǎng)為CGMCC?NO：5466菌種在如下配制的斜面上生長良好，以重量計，斜面培養(yǎng)基配方為：蛋白胨0.5﹪～1﹪、牛肉膏0.3﹪～0.5﹪、酵母膏0.3﹪～0.5﹪、葡萄糖0.3﹪～0.5﹪、氯化鈉0.3﹪～0.5﹪、瓊脂1.8﹪～2.2﹪、水94.8﹪～96.5﹪，其中所述各組分之和為100﹪，調(diào)pH值6.9～7.1，0.1MPa滅菌20分鐘～30分鐘，制成試管斜面，接種該菌種，32℃～35℃，培養(yǎng)24小時～26小時后，放入5℃冰箱中備用，或向菌斜面上注入已滅菌液體石蠟后保藏或以脫脂牛奶為載體冷凍干燥真空封口保藏。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種木聚糖酶的生產(chǎn)方法，其特征是所述的搖瓶發(fā)酵為CGMCC?NO：5466菌種在規(guī)定的培養(yǎng)條件下可產(chǎn)生高活性木聚糖酶，這種培養(yǎng)條件是：以重量計，培養(yǎng)基配方為麥麩5﹪～8﹪、纖維質(zhì)粉1.5﹪～2﹪、葡萄糖0.3﹪～0.5﹪、硫酸銨0.3﹪～0.5﹪、玉米漿1﹪～2﹪、磷酸氫二鉀0.1﹪～0.2﹪、氯化鈉0.3﹪～0.5﹪、水86.3﹪～91.5﹪，其中所述各組分之和為100﹪，滅菌前，調(diào)pH值為8.0～8.5，0.1MPa滅菌20分鐘～35分鐘，培養(yǎng)條件：33℃～35℃，搖床轉(zhuǎn)速260?r/min?～280r/min，培養(yǎng)48小時～52小時。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種木聚糖酶的生產(chǎn)方法，其特征是所述的酶液制備為由茄瓶斜面到種子罐到發(fā)酵罐，二級發(fā)酵，制備標(biāo)準(zhǔn)化酶液。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種木聚糖酶的生產(chǎn)方法，其特征是種子培養(yǎng)基配方為：以重量計，麥麩5﹪～8﹪、玉米粉1.5﹪～2﹪、硫酸銨0.3﹪～0.5﹪、玉米漿1﹪～2﹪、磷酸氫二鉀0.1﹪～0.2﹪、氯化鈉0.3﹪～0.5﹪、水86.8﹪～91.8﹪，其中所述各組分之和為100﹪，滅菌前，調(diào)pH值為6.5～7.0，0.1MPa滅菌30分鐘～35分鐘，種子罐裝料總體積不超過70％；培養(yǎng)條件：溫度33℃～38℃，攪拌轉(zhuǎn)速180?r/min～220?r/min，通氣量以v/v?計：0小時～5小時，1：0.40～0.46，5小時以后，1：0.50～0.56，罐壓0.06?MPa～0.07MPa，培養(yǎng)周期為7小時～9小時。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種木聚糖酶的生產(chǎn)方法，其特征是產(chǎn)酶發(fā)酵罐的培養(yǎng)基配方為：以重量計，麥麩5﹪～8﹪、纖維質(zhì)粉1.5﹪～2﹪、葡萄糖0.3～0.5﹪、硫酸銨0.3﹪～0.5﹪、玉米漿1﹪～2﹪、磷酸氫二鉀0.1﹪～0.2﹪、氯化鈉0.3﹪～0.5﹪、水86.3﹪～91.5﹪，其中所述各組分之和為100﹪，滅菌前，調(diào)pH值為8.0～8.5，0.1MPa滅菌30分鐘～35分鐘，裝料總體積不超過70﹪；培養(yǎng)條件：溫度33℃～38℃，攪拌轉(zhuǎn)速180?r/min～220?r/min，通氣量以v/v?計：0小時～2小時，1：0.40?～0.42，2小時～4小時，1:0.50～0.52，4小時～6小時，1:0.55～0.68，6小時以后1:0.60～0.62，罐壓0.06?MPa～0.07MPa，發(fā)酵周期為48小時～52小時。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種木聚糖酶的生產(chǎn)方法，其特征是在產(chǎn)酶發(fā)酵罐的培養(yǎng)基配方中加入0.3﹪～0.4﹪的二水合氯化鈣，相應(yīng)減少水的用量，其中所述各組分之和為100﹪。

8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種木聚糖酶的生產(chǎn)方法，其特征是在制備標(biāo)準(zhǔn)化酶液中，將產(chǎn)酶發(fā)酵罐的發(fā)酵醪液經(jīng)過板框過濾、硅藻土除菌，經(jīng)防腐處理得到在15℃密封存放三個月條件下，酶活力保持率為95﹪以上的標(biāo)準(zhǔn)木聚糖酶液。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種木聚糖酶的生產(chǎn)方法，其特征是發(fā)酵醪液經(jīng)板框過濾后，在發(fā)酵濾液中加入十二水合磷酸氫二鈉和二水合氯化鈣取雜除菌，其用量分別為發(fā)酵濾液質(zhì)量的2.8﹪～3.5﹪和1.0﹪～1.3﹪。

10.一種根據(jù)權(quán)利要求1所述方法生產(chǎn)的木聚糖酶，其特征是所述木聚糖酶為內(nèi)切型酶，不產(chǎn)纖維素酶，對結(jié)晶纖維素、羧甲基纖維素均沒有活性；酶活力在濃度5mMol/L以下，不受Fe²⁺?、Fe³⁺?、Zn²⁺、Cu²⁺金屬離子抑制；其酶作用pH范圍為pH4.5～10.5，溫度范圍為40℃～75℃；適宜pH范圍為pH7.0～9.0，適宜溫度范圍為45℃～65℃；最適pH范圍為pH8.5～9.0，最適溫度50℃～55℃。