[發明專利]一株抑制椰子莖瀉血病、殺鱗翅目害蟲的蘇云金芽孢桿菌及其應用

有效

• 申請號: 201310488408.3
• 申請日: 2013-10-18
• 公開（公告）號: CN103555614A
• 公開（公告）日: 2014-02-05
• 發明（設計）人: 孫曉東;余鳳玉;覃偉權;呂朝軍;劉麗
• 申請（專利權）人: 中國熱帶農業科學院椰子研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/00;A01P3/00;A01P7/04;C12R1/07
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技術領域

本發明涉及一種新型微生物菌株，具體涉及一種抑制椰子莖瀉血病、殺鱗翅目害蟲小菜蛾的蘇云金芽孢桿菌菌株篩選方法及活性菌株制備方法，屬于生物農藥領域。

背景技術

小菜蛾屬鱗翅目菜蛾科，是十字花科蔬菜的一種重要害蟲，也是當今世界上最難防治的害蟲之一，據估算，全球每年用于防治小菜蛾的費用超過10億美元。由于長期使用化學農藥防治小菜蛾危害，導致其對不同類型的殺蟲劑都容易產生抗藥性。目前，控制其危害較為困難，該蟲在我國南方常年危害嚴重。

目前，莖瀉血病已成為椰子(Cocos?nucifera?L.)的主要病害之一，分布范圍廣，幾乎所有椰子種植區都有報道。Ohler(1906)最早報道了發生于斯里蘭卡的椰子莖瀉血病。隨后印度(1922)、菲律賓(1922)、馬來西亞(1923)、特立尼達島(1940)和佛羅里達州(1959)等椰子種植區相繼報道了該病的發生。Kartika等(1984)以及Nambiar等(1988)均報道椰子莖瀉血病會嚴重影響到椰子果產量；R.N.Dulce等(2009)報道巴西塞爾希培州的椰子樹爆發椰子莖瀉血病，約有50個椰子園的椰子樹表現莖瀉血病癥狀，莖瀉血病成為巴西椰子樹的主要病害之一。該病一般從傷口侵入，如果不采取防治措施，發病植株在癥狀出現后3～4個月內即死亡。陰雨潮濕天氣適合該病發生流行。

蘇云金芽孢桿菌(Bacillus?thuringiensis，簡稱Bt)是革蘭氏陽性芽孢桿菌屬的一個種。它形成芽孢的過程中會形成具有殺蟲活性的晶體蛋白質(ICPs)。該殺蟲晶體蛋白由cry基因編碼，現在已經發現蘇云金芽孢桿菌大多數菌株都能產生多種類型的晶體蛋白，對鱗翅目(Lepidoptera)、雙翅目(Diptera)、鞘翅目(Coleoptera)、膜翅目(Hymenoptera)、同翅目(Homoptera)、直翅目(Orthoptera)、食毛目(Mallophaga)等多種昆蟲(Faust?G?M?etal，1983；Tailor?R?et?al，1992；Hoffmann?A?et?al，1998；Pinto?L?M?et?al，2003；Rowell?B?et?al，2005)，以及線蟲、螨類和原生動物等具有特異的殺蟲活性，Bt的殺蟲范圍已經擴大到包括大量農林及衛生害蟲在內的無脊椎的4個門和節肢動物門中9個目的生物。Bt殺蟲活性對非靶標生物無害，因此被制成生物殺蟲劑廣泛的應用于農業、林業和衛生害蟲的防治(束長龍等，2007)。目前，有許多國家如美國、日本、法國、比利時都對Bt進行了生產，其中美國生產量最大。我國Bt生產開始于20世紀60年代，至今達到近60家生產廠家，年產量達到6萬余噸，已經在20多個省用于糧、棉、果、蔬、林的20多種害蟲(楊懷文，2005)。蘇云金芽孢桿菌的殺蟲毒蛋白在基因工程領域也取得了很大的成就，1987年Vaeck首次報道將crylAb基因導入煙草，使轉基因煙草避免了煙草天蛾的侵害，顯示出Bt基因在轉基因植物應用中的巨大潛力。隨后經過修飾的crylAb和crylAc相繼在棉花、煙草、番茄、玉米、馬鈴薯、大豆、白云杉等植物得到高水平表達。到2004年，全球已經種植了80萬公頃的轉Bt基因植物。(Vaeck，et?al，1987；Takeshi?Ito?et?al，2005)。

發明內容

本發明的目的在于提供一種對小菜蛾具有殺蟲效果好、同時抑制椰子真菌病害椰子瀉血病的蘇云金芽孢桿菌菌株。

本發明菌株是通過采集海南文昌高隆灣濱海土壤樣品分離篩選出的一株生產性狀好、對鱗翅目害蟲小菜蛾具有高毒力的蘇云金芽孢桿菌，菌株WENCHANG-BT20，已于2013年07月26日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)保藏，地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所，保藏編號：CGMCC?NO.7967，分類命名蘇云金芽孢桿菌Bacillus?thuringiensis；菌株細胞及晶體形態見圖1。

本發明Bt菌株接種在1/2LB平板上，30℃培養觀察菌落形態特征。

本發明蘇云金芽孢桿菌菌株WENCHANG-BT20具有如下有益效果：

本發明從海南濱海土壤樣品中直接分離篩選的蘇云金芽孢桿菌菌株WENCHANG-BT20，攜帶有crylAa、crylBe、crylia、cry2Aa四種殺蟲蛋白編碼基因，殺蟲毒力強、殺蟲效果好，同時具有一定的抑制真菌病害的效果。

附圖說明