[發明專利]一種ApoB100酵母重組疫苗及其制備方法和應用有效

申請號：	201310485936.3	申請日：	2013-10-16
公開（公告）號：	CN103520713A	公開（公告）日：	2014-01-22
發明（設計）人：	張智英;麻麗霞;李欣憶;張婷婷;張優優;劉中天	申請（專利權）人：	西北農林科技大學
主分類號：	A61K39/00	分類號：	A61K39/00;A61P9/10;A61P3/06;C12N15/81;C12N1/19;C12R1/865
代理公司：	西安通大專利代理有限責任公司 61200	代理人：	汪人和
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種 apob100 酵母重組疫苗及其制備方法應用
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【說明書】：

技術領域

本發明屬于基因工程技術領域，涉及一種ApoB100酵母重組疫苗及其制備方法和應用。

背景技術

在21世紀，心腦血管疾病已經成為人類健康的第一殺手，動脈粥樣硬化(atheroma)是一組稱為動脈硬化的血管病中常見的最重要的一種，多由脂肪代謝紊亂、神經血管功能失調引起，是由遺傳、環境等多因素導致的老年多發性疾病，常導致血栓形成、供血障礙等，近年來有逐漸年輕化和上升趨勢。在眾多的發病因素中，脂質代謝紊亂，尤其是高膽固醇血癥與其關系最為密切。

脂蛋白在人類動脈粥樣硬化(As)形成及進展過程中起主要作用，它是由脂質及載脂蛋白(Apo)構成。載脂蛋白在脂蛋白的代謝過程中起關鍵作用，主要分為A、B、C、D、E五類。載脂蛋白E是血漿脂蛋白的重要成分，它的主要機能是作為乳糜微粒(cM)殘粒受體和低密度脂蛋白(LDL)受體的配體，在脂質殘粒的代謝中起重要作用，對脂質的運輸和代謝發揮主要作用。有研究表明，載脂蛋白E（ApoE）基因缺陷小鼠無論正常或者高脂飲食均可形成嚴重的高血脂癥及AS，其病變的發展同人類極其相似，故常被用于研究AS發病機制以及抗AS病理學研究。載脂蛋白B（ApoB）為人體主要的載脂蛋白，為乳糜微粒（CM）、及低密度脂蛋白（VLDL）、中間密度脂蛋白、低密度脂蛋白（LDL）的構成成分，在脂類轉運和代謝過程中起著極其重要的作用。人體含有兩型ApoB分子，ApoB100參與VLDL的裝配與分泌。在血液中，VLDL可代謝轉化為富含膽固醇的LDL。每個LDL顆粒上僅含一分子ApoB100，是唯一的蛋白成分，同時也介導80%的LDL與受體結合使之被清除體外。ApoB48為CM合成和分泌所必需，參與外源性脂質的消化、吸收和運輸。目前ApoB已被鎖定為促使動脈粥樣硬化（AS）與冠心病（CAD）的危險因子。

已研究發現免疫反應與動脈粥樣硬化的發病相關,因此使用免疫抑制以及接種疫苗成為治療動脈粥樣硬化的新方法。許多研究證實,大部分免疫抑制藥物對心血管的危險因素(包括血脂異常、高血壓病、糖尿病)均有負面作用。因此,限制了該類藥物在抗動脈粥樣硬化上的應用。免疫接種常用的方法就是通過接種疫苗,暴露抗原誘導機體免疫反應,產生抗體。最近,臨床上正在嘗試使用免疫接種疫苗的方法治療非感染性疾病,包括風濕性關節炎、I型糖尿病和Alzheimer’s病等。

發明內容

本發明解決的問題在于提供一種ApoB100酵母重組疫苗及其制備方法和應用，通過基因工程發酵酵母疫苗遞呈抗原ApoB100，誘導機體產生特異性抗體，有助于動脈粥樣等慢性炎癥性疾病的防治。

本發明是通過以下技術方案來實現：

一種ApoB100酵母重組疫苗，該酵母重組疫苗以酵母作為宿主細胞，轉染包含ApoB100基因片段的真核表達載體。

所述的ApoB100基因片段的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示。

所述的真核表達載體為JMB88-HA-OVA-hApoB100，是將ApoB100基因片段克隆到JMB88-HA-OVA-MCS載體中的OVA的下游而得到的；

所述的酵母為酵母JMY1。

該酵母重組疫苗能夠表達OVA-ApoB100融合蛋白，并將表達的ApoB100肽遞呈給抗原遞呈細胞，誘導免疫反應，產生針對ApoB100的抗體。

該酵母重組疫苗能夠表達ApoB100肽，并將表達的ApoB100肽遞呈給抗原遞呈細胞，誘導免疫反應，產生針對ApoB100的抗體。

一種真核表達載體，該真核表達載體為JMB88-HA-OVA-hApoB100，是將ApoB100基因片段克隆到JMB88-HA-OVA-MCS載體中而得到的。

一種ApoB100酵母重組疫苗的制備方法，包括以下操作：

1）以人基因組為模板克隆ApoB100基因片段，并將ApoB100基因克隆到真核表達載體JMB88-HA-OVA-MCS當中，構建真核表達載體JMB88-OVA-hApoB100；