[發明專利]滇重樓的分子鑒定方法

無效

• 申請號: 201310484979.X
• 申請日: 2013-10-16
• 公開（公告）號: CN103484558A
• 公開（公告）日: 2014-01-01
• 發明（設計）人: 劉濤;楊生超;謝世清;年麗菊;李瑪;王玲
• 申請（專利權）人: 云南農業大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 昆明合眾智信知識產權事務所 53113
• 代理人: 康珉

1.滇重樓的分子鑒定方法，包括以下步驟：

（1）對待鑒定樣品進行總DNA提取；

（2）PCR反應,以步驟（1）提取的總DNA為模板，用psbA/trnH引物擴增，獲得擴增產物，所述的psbA/trnH引物由上游引物psbA和下游引物trnH組成，所述的上游引物psbA的堿基序列如SEQ?ID?NO：1所示，下游引物trnH的堿基序列如SEQ?ID?NO：2所示；

（3）將擴增產物測序后與滇重樓條形碼比對，所述的滇重樓條形碼的堿基序列如SEQ?ID?NO：3所示，當擴增產物的序列與SEQ?ID?NO：3所示的堿基序列的相似性達到98.2%以上，且在位點1-4上的堿基為CTGA、在位點19上的堿基缺失、在位點77上的堿基都為C、在位點138上的堿基都為C、在位點792上的堿基為G、在位點1110-1113上的堿基為GGCG、在位點1116上的堿基為G和在位點1119-1120上的堿基為CC時，該待鑒定樣品為滇重樓。

2.根據權利要求1所述的滇重樓的分子鑒定方法，在步驟（1）所述的待鑒定樣品的總DNA提取中，待測樣品取0.5g，按照CTAB法提取總DNA，提取的總DNA樣本經RNA酶A純化后，用紫外分光光度計測定260nm和280nm下的光密度值，當測得DNA純度達到OD260/OD280在1.6-1.8之間，則將總DNA濃度稀釋到200ng/μl，用于步驟（2）PCR反應。

3.根據權利要求1或2所述的滇重樓的分子鑒定方法，在步驟（2）所述的PCR反應中，反應熱循環程序為：94℃預變性5min；然后進入循環，每個循環94℃變性30sec，54℃退火30sec，72℃延伸90sec，共30個熱循環，最后延伸72℃延伸7min；4℃冷卻后取出擴增產物。