[發(fā)明專利]一種伯胺基含量準(zhǔn)確測定方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310482730.5
• 申請(qǐng)日: 2013-10-16
• 公開（公告）號(hào): CN103512828A
• 公開（公告）日: 2014-01-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李天鐸;許靜;姜青偉;唐小龍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東輕工業(yè)學(xué)院
• 主分類號(hào): G01N7/18
• 分類號(hào): G01N7/18
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種伯胺基含量準(zhǔn)確測定的方法，尤其涉及一種明膠、蛋白質(zhì)等生物大分子中伯胺基含量準(zhǔn)確測定的方法。?

背景技術(shù)

甲醛滴定法、茚三酮比色法、TNBS比色法、Van?Slyke法以及氣相色譜法是測定伯胺基含量的常用方法。其中，甲醛滴定法通過滴定甲醛與游離伯胺基結(jié)合后解離出的H+推算伯胺基含量，然而整個(gè)滴定過程中不發(fā)生滴定突躍，表明該法不能測準(zhǔn)伯胺基含量；TNBS比色法是利用三硝基苯磺酸與伯胺基發(fā)生烷基化反應(yīng)測定伯胺基含量，然而羰基α碳上的氫、活潑亞甲基等也可參與烷基化反應(yīng)，該法副反應(yīng)多，實(shí)驗(yàn)誤差大；茚三酮比色法中存在類似的問題。Van?Sykel法通過量取伯胺基與亞硝酸反應(yīng)產(chǎn)生N2的體積計(jì)算伯胺基含量。氣相色譜檢測法利用了Van?Slyke法并通過氣相色譜檢測N2含量，然而氣相色譜不能集氣，要求反應(yīng)在為5-10分鐘內(nèi)結(jié)束，盡管該方法能準(zhǔn)確測定小分子中氨基含量，卻不滿足大分子反應(yīng)時(shí)間長的需求。相對(duì)而言，Van?Slyke法具有副反應(yīng)少、可靠性高、滿足大分子反應(yīng)平衡時(shí)間長等顯著特點(diǎn)，是測定多肽反應(yīng)體系中伯胺基轉(zhuǎn)化率的最優(yōu)方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是在伯胺基定量儀裝置研制基礎(chǔ)上（ZL2012202419656），提供一種伯胺基含量準(zhǔn)確測定的方法，尤其涉及一種明膠、蛋白質(zhì)等大分子生物化合物分子中伯胺基含量準(zhǔn)確測定的方法，為生物大分子化合物結(jié)構(gòu)測定提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

本發(fā)明采取的技術(shù)方案為，準(zhǔn)備好伯胺基定量儀，排空體系內(nèi)的空氣，配制一定濃度的待測液，固定亞硝酸鈉的濃度及冰醋酸與亞硝酸鈉的配比，選定測試時(shí)間、測試溫度，對(duì)明膠、蛋白質(zhì)溶液等生物大分子化合物溶液進(jìn)行測定。

上述伯胺基測定方法，包括步驟如下：

1）準(zhǔn)備伯氨基定量儀；

2）排空體系內(nèi)的空氣；

3）配制待測液；

4）進(jìn)行測定；按下述公式計(jì)算伯氨基含量：

其中，n₀為待測生物大分子樣品中伯氨基含量（mol），n_N2為測得的氮?dú)獾牧浚╩ol），為待測生物大分子樣品的質(zhì)量濃度，m為待測生物大分子樣品總質(zhì)量（g），ρ為氮?dú)獾馁|(zhì)量密度（g/mL），根據(jù)量氣時(shí)的溫度T及大氣壓P查表得到，V為測量氮?dú)獾捏w積（mL），M為氮?dú)夥肿恿浚╣?/?mol），C₀為待測生物大分子樣品中伯氨基含量（mol/g）。

優(yōu)選的，步驟1）所述的準(zhǔn)備伯氨基定量儀，具體操作如下：各旋塞涂抹真空硅脂，密封好各個(gè)接口，其中半球洗氣瓶排液口（26）和反應(yīng)器排液口（17）用止水夾夾好，以防止液體泄漏。

優(yōu)選的，步驟2），具體操作如下：首先將洗液，從緩沖瓶（23）緩緩倒入，注滿半球洗氣瓶（20），并使洗液至緩沖瓶（23）體積的1/3處。調(diào)節(jié)斜孔三通旋塞（29）以洗液充滿至斜孔三通旋塞（29）處，旋動(dòng)斜孔三通旋塞（29），使斜孔三通旋塞（29）不與各方相通。從水準(zhǔn)瓶（32）注入去離子水，旋動(dòng)斜孔三通旋塞（29）使量氣管與排液口（22）相通，抬高水準(zhǔn)瓶（32）的位置，當(dāng)量氣管（31）充滿去離子水后，旋動(dòng)斜孔三通旋塞（29），使斜孔三通旋塞（29）不與各方相通。旋動(dòng)三通旋塞（10），使半球洗氣瓶（20）中的洗液充滿至三通旋塞（10），然后調(diào)節(jié)三通旋塞（10）使得半球洗氣瓶（20）不與反應(yīng)裝置（Ⅰ）、回收裝置（Ⅳ）相通。該操作可以使量氣、洗氣裝置中的空氣被完全排出，此時(shí)半球洗氣瓶（20）與量氣管（31）中均充滿液體，并與外界空氣隔絕。

開啟循環(huán)水浴，設(shè)定測試所需溫度，從加料管（3）加入冰醋酸，然后加入亞硝酸鈉水溶液，關(guān)閉加料管（3），加去離子水液封，用少量去離子水將加料管（14）下部細(xì)管中氣體趕入反應(yīng)器（11），關(guān)閉加料管（14）。旋動(dòng)三通旋塞（9），使反應(yīng)器（11）和三通旋塞（10）相通。開啟磁力攪拌（7），反應(yīng)器（11）內(nèi)反應(yīng)生成NO氣體，保持5分鐘，排凈反應(yīng)器（11）內(nèi)空氣。