[發明專利]碳納米管載體免注射疫苗、制備方法及其在制備水產免疫苗種中的應用

有效

• 申請號: 201310482649.7
• 申請日: 2013-10-15
• 公開（公告）號: CN103520737A
• 公開（公告）日: 2014-01-22
• 發明（設計）人: 王高學;朱斌;劉廣路;凌飛
• 申請（專利權）人: 西北農林科技大學
• 主分類號: A61K47/48
• 分類號: A61K47/48;A61K39/00;A61K39/15;C12N15/46;C12N15/63;C07K14/14;A61P31/14
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 徐文權

1.一種碳納米管載體免注射疫苗，其特征在于：包括單壁碳納米管以及連接在單壁碳納米管上的抗原。

2.根據權利要求1所述一種碳納米管載體免注射疫苗，其特征在于：所述抗原為蛋白質。

3.根據權利要求1所述一種碳納米管載體免注射疫苗，其特征在于：所述抗原的質量分數為10-50%。

4.一種如權利要求1所述碳納米管載體免注射疫苗在制備水產免疫苗種中的應用。

5.根據權利要求4所述碳納米管載體免注射疫苗在制備水產免疫苗種中的應用，其特征在于：將碳納米管載體免注射疫苗用水直接稀釋并攪拌混合均勻，然后潑灑于含有夏花魚種的池中進行浸浴。

6.根據權利要求5所述碳納米管載體免注射疫苗在制備水產免疫苗種中的應用，其特征在于：所述含有夏花魚種的池中抗原的濃度為2.0-5.0mg/L，浸浴時間為1-2h。

7.一種碳納米管載體免注射疫苗的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

將單壁碳納米管進行酸化處理，然后與抗原蛋白連接。

8.根據權利要求7所述一種碳納米管載體免注射疫苗的制備方法，其特征在于：所述抗原蛋白的制備方法包括以下步驟：

第一步，通過PCR擴增獲取抗原蛋白對應的目的基因；

第二步，經過第一步后，構建目的基因克隆載體和原核表達載體；

第三步，經過第二步后，構建抗原蛋白原核表達菌株；

第四步，經過第三步后，對表達菌株發酵培養，然后進行抗原蛋白提取、純化和復性。

9.根據權利要求7所述一種碳納米管載體免注射疫苗的制備方法，其特征在于：所述碳納米管載體免注射疫苗的制備方法的具體步驟包括：

將單壁碳納米管加入到硫酸和硝酸組成的混和酸中后于65-75℃水浴中超聲處理2-8h，然后用去離子水洗滌，再用硝酸回流24-36h，回流后用純水洗滌，然后離心、真空干燥至恒重，得到酸化單壁碳納米管；

將酸化單壁碳納米管加入到2-（N-嗎非啉）乙磺酸水溶液中后超聲處理0.5-2h得混合物，向混合物中加入乙基二甲基胺丙基碳化二亞胺和N-羰基琥珀酸亞胺，然后超聲處理2-4h、離心，將離心得到的沉淀加入PBS緩沖液中，向PBS緩沖液中再加入抗原蛋白，然后超聲處理2-4h、室溫攪拌48-72h，攪拌后在純水中透析3-5d，透析后離心、真空干燥，即得碳納米管載體免注射疫苗。