[發明專利]果蠅腸道免疫相關基因的篩選方法無效
| 申請號： | 201310479061.6 | 申請日： | 2013-10-15 |
| 公開（公告）號： | CN103598147A | 公開（公告）日： | 2014-02-26 |
| 發明（設計）人： | 金麗華;郝陽光;劉強 | 申請（專利權）人： | 東北林業大學;金麗華 |
| 主分類號： | A01K67/033 | 分類號： | A01K67/033;C12Q1/68 |
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| 地址： | 150040 黑龍*** | 國省代碼： | 黑龍江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 果蠅 腸道 免疫 相關 基因 篩選 方法 | ||
1.一種篩選果蠅腸道免疫相關基因的方法，其特征在于：
（1）從flybase網站上查找感興趣的基因，并從國內外著名的果蠅保種中心購買所要篩選的基因突變體果蠅。
（2）對突變體果蠅喂食微生物，觀察突變體果蠅的生存率、腸道對微生物的清除能力，及喂食微生物后突變體果蠅腸道的形態變化、腸道細胞的凋亡情況。
（3）對突變體果蠅喂食能夠引起腸道炎癥及腸道應激反應的化學試劑，觀察突變體果蠅的生存率、腸道的形態變化、腸道細胞的凋亡情況。
（4）喂食微生物及化學試劑后檢測與果蠅腸道免疫、腸道炎癥及應激反應相關的信號通路的活化情況。
2.權利要求1所述的方法，其特征在于，基因突變體果蠅均購自GenExel果蠅保種中心，且均為P因子插入突變體。
3.權利要求1所述的方法，其特征在于，所述喂食的微生物為昆蟲致病性真菌Beauveria?bassiana及非致病性細菌Micrococcus?luteus。
4.權利要求1或3所述的方法，其特征在于，喂食Beauveria?bassiana的孢子濃度為OD600=2，Micrococcus?luteus濃度為OD600=150，觀察突變體果蠅的生存率。
5.權利要求1或3所述的方法，其特征在于，喂食連接Alexa?Fluor488熒光的Micrococcus?luteus和Beauveria?bassiana的孢子2h后喂食5%蔗糖6h，觀察突變體果蠅腸道對這兩種微生物的清除能力。
6.權利要求1或3所述的方法，其特征在于，喂食OD600值為150的Micrococcus?luteus，72h后觀察腸道的形態變化，用7-AAD染色后，觀察腸道細胞的死亡情況。
7.權利要求1所述的方法，其特征在于，所述喂食能夠引起腸道炎癥及腸道應激反應的化學試劑為過氧化物（H2O2）、高鹽離子（NaCl）以及表面活性劑（SDS）。
8.權利要求1或7所述的方法，其特征在于,喂食H2O2的濃度為1%，SDS的濃度為0.5%，NaCl的濃度為0.4M，觀察突變體果蠅的生存率。
9.權利要求1所述的方法，其特征在于，喂食0.5%的SDS，96h后觀察突變體腸道的形態變化，144h后觀察腸道細胞的死亡情況。
10.權利要求1所述的方法，其特征在于，給果蠅喂食微生物或化學試劑后，選取多個不同時間點分離果蠅腸道，并用real-time?PCR方法檢測腸道免疫相關信號通路靶基因的轉錄情況。
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