[發(fā)明專利]梅毒試紙條及其制備方法、梅毒檢測卡及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310478624.X
• 申請日: 2013-10-14
• 公開（公告）號: CN104330566A
• 公開（公告）日: 2015-02-04
• 發(fā)明（設計）人: 趙磊;席宇
• 申請（專利權(quán)）人: 趙磊
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/532
• 代理公司: 北京集佳知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 趙青朵

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及免疫檢測技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及梅毒試紙條及其制備方法、梅毒檢測卡及其制備方法。

背景技術(shù)

梅毒是由梅毒螺旋體感染人體而發(fā)生的常見性傳播疾病，已經(jīng)問世數(shù)百年了，目前在世界范圍均有分布，是十分重要的性傳播疾病，根據(jù)傳染來源分為獲得性梅毒和先天性梅毒。其中，獲得性梅毒是指成人通過性行為、輸血、手術(shù)而被感染的梅毒，根據(jù)臨床表現(xiàn)分為三期，主要癥狀包括侵犯皮膚粘膜和累及內(nèi)臟器官，是一種較為嚴重的性傳播疾病；先天性梅毒是由于患梅毒的孕婦未經(jīng)及時治療或治療不當，梅毒螺旋體通過胎盤直接進入胎兒體內(nèi)而引起的梅毒。

目前，梅毒的實驗室檢測方法主要包括暗視野顯微鏡檢查、直接熒光抗體檢查、血清學檢查和腦脊液檢查，最常見的檢測方法為血清學檢查。血清學檢查又分為特異性抗體檢測方法和非特異性抗體檢測方法，特異性抗體檢測方法主要包括酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）和膠體金法；非特異性抗體檢測方法主要包括快速血漿反應素卡片試驗（RPR）和甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST）。

特異性抗體檢測方法的優(yōu)點是特異性強、靈敏度高，但存在兩方面的缺陷，一方面由于其檢測是IgG抗體，而人體感染梅毒螺旋體后，需要2周以上的時間才會產(chǎn)生IgG抗體，因此感染初期無法檢測到梅毒；另一方面梅毒特異性IgG抗體產(chǎn)生后會終身攜帶，即使梅毒治療好后人體還是會攜帶梅毒特異性IgG抗體，因此單純檢測梅毒特異性IgG抗體無法區(qū)分梅毒是現(xiàn)癥感染還是既往感染，既往感染對現(xiàn)癥感染將會產(chǎn)生一定的干擾，還需要進一步做非特異性抗體檢測。

非特異性抗體檢測方法的優(yōu)點是靈敏度高，但特異性較差，假陽性率較高。在一般人群中此類試驗的假陽性率為1%～2%，然而在吸毒者中假陽性率可高達10%，另外在結(jié)核病、結(jié)締組織病及孕婦等特殊人群中假陽性率均有不同程度的升高，因此還需做特異抗體檢測確診。

基于特異性抗體檢測方法和非特異性抗體檢測方法均存在一定的缺陷，因此提供一種靈敏度高、特異性強、不受既往感染干擾的梅毒檢測卡，具有重要的現(xiàn)實意義。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明提供了梅毒試紙條及其制備方法、梅毒檢測卡及其制備方法。該梅毒試紙條通過將膠體金標記心磷脂，從而實現(xiàn)了將梅毒特異性抗體檢測和梅毒非特異性抗體檢測相結(jié)合的目的，既具有靈敏度高、特異性強、假陽性率低的優(yōu)點，避免了既往感染對現(xiàn)癥感染的干擾，且操作簡單方便。

為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供了一種梅毒試紙條，梅毒試紙條包括底板1，底板1依次設置有樣品墊2、玻璃纖維素膜3、硝酸纖維素膜4、吸水紙5；

玻璃纖維素膜3上設置有膠體金標記的梅毒螺旋體特異性抗原和膠體金標記的心磷脂-磷脂結(jié)合蛋白復合體；

膠體金標記的心磷脂-磷脂結(jié)合蛋白復合體的制備方法為：取心磷脂和磷脂結(jié)合蛋白混合，經(jīng)第一溫育，得到心磷脂-磷脂結(jié)合蛋白復合體，取心磷脂-磷脂結(jié)合蛋白復合體和膠體金混合，經(jīng)第二溫育、封閉，即得膠體金標記的心磷脂-磷脂結(jié)合蛋白復合體；

硝酸纖維素膜4上設置有第一檢測區(qū)6、第二檢測區(qū)7、第一質(zhì)控區(qū)8和第二質(zhì)控區(qū)9；

第一檢測區(qū)6設置有重組梅毒螺旋體抗原，第二檢測區(qū)7設置有鼠抗人IgG單克隆抗體，第一質(zhì)控區(qū)8設置有鼠抗梅毒螺旋體IgG單克隆抗體，第二質(zhì)控區(qū)9設置有兔抗磷脂結(jié)合蛋白IgG單克隆抗體；

或者第一檢測區(qū)6設置有鼠抗人IgG單克隆抗體，第二檢測區(qū)7設置有重組梅毒螺旋體抗原，第一質(zhì)控區(qū)8設置有兔抗磷脂結(jié)合蛋白IgG單克隆抗體，第二質(zhì)控區(qū)9設置有鼠抗梅毒螺旋體IgG單克隆抗體。

目前，梅毒特異性抗體的檢測采用膠體金免疫層析法進行檢測，該方法的檢測原理為：將特異性的抗原或抗體以條帶狀固定在膜上，膠體金標記試劑（抗體或單克隆抗體）吸附在結(jié)合墊上，當待檢樣本加到試紙條樣本墊上后，通過毛細作用向前移動，溶解結(jié)合墊上的膠體金標記試劑后相互反應，當移動至固定的抗原或抗體的區(qū)域時，待檢物與金標試劑的結(jié)合物又與之發(fā)生特異性結(jié)合而被截留，聚集在檢測帶上，可通過肉眼觀察到顯色結(jié)果，使用十分方便。利用此方法制作試紙條時，膠體金標記的抗體一般為蛋白質(zhì)等生物大分子，而梅毒非特異性抗體——心磷脂為疏水性的小分子，到目前為止還未有如何用膠體金標記心磷脂的報道，因此利用膠體金標記技術(shù)檢測梅毒非特異性抗體的方法還沒有實現(xiàn)。本發(fā)明通過磷脂結(jié)合蛋白的鍵橋作用，實現(xiàn)了心磷脂和膠體金的結(jié)合，達到了以膠體金標記技術(shù)檢測梅毒非特異性抗體的目的。