[發(fā)明專利]柱狀黃桿菌多克隆抗體的制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310478221.5
• 申請日: 2013-10-15
• 公開（公告）號: CN103524616A
• 公開（公告）日: 2014-01-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 呂娜;張捷
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江萬里學院
• 主分類號: C07K16/12
• 分類號: C07K16/12
• 代理公司: 吉林長春新紀元專利代理有限責任公司 22100
• 代理人: 白冬冬

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

細菌性疾病是水生動物病害中最嚴重的一大類傳染性疾病。據(jù)統(tǒng)計，我國每年因水生動物病害問題而造成的直接經(jīng)濟損失就達百億元之巨，并且還有上升的趨勢。對病原進行準確檢測是疾病確診和控制的前提。同時，水產(chǎn)品進入終端消費市場，對水產(chǎn)品是否含有病原微生物進行準確而又快速的檢測是食品安全的重要保障。在動物性水產(chǎn)品出入境檢疫上，對病原體進行有效檢疫對保護本國安全、防止病原擴散傳播具有極為重要的意義。

傳統(tǒng)的水生動物細菌性疾病的診斷，主要依靠對患病魚體的臨床癥狀、病理組織學檢查等進行分析。但由于水生動物疾病常常存在不同的病原微生物會引起類似的癥狀，即使同一病原在不同動物或同一種動物中癥狀也不盡一致，因此，只依靠臨床觀察實現(xiàn)確診困難重重。隨后又發(fā)展了實驗室特異性的診斷方法，如細菌選擇性培養(yǎng)、生化鑒定、PCR法等。但這幾種檢測方法在準確性及檢測速度上都有所限制，而且操作不便，需專業(yè)人才，一般只適應(yīng)于實驗室診斷或研究應(yīng)用，而不適用于生產(chǎn)。而水生動物疾病往往呈爆發(fā)性，一旦延誤，后果不堪設(shè)想。隨著免疫學技術(shù)在生物醫(yī)學及動植物病原菌檢測上的廣泛應(yīng)用，將該技術(shù)應(yīng)用于檢測水生動物細菌性疾病已經(jīng)成為可能。

柱狀黃桿菌(Flavobacterium?columnaris)屬于黃桿菌目，黃桿菌科，黃桿菌屬，是一種世界范圍的水生動物致病菌（Bernardet?J?F,?Segers?P,?Vancanneyt?M,?et?al.?Cutting?a?Gordian?knot:?emended?classification?and?div?of?the?genus?Flavobacterium,?emended?div?of?the?family?Flavobacteriaceae,?and?proposal?of?Flavobacterium?hydatis?nom.?nov.?(basonym,?Cytophaga?aquatilis?Strohl?and?Tait?1978)[J].?Int?J?Syst?Bacteriol,1996,?46(1):?128-148.），該菌所致魚類病害分布于包括我國在內(nèi)的世界多個國家，如歐洲、加拿大、美國、日本等。其宿主范圍極其廣泛，可致鮭科、鯉科、亞口魚科、叉尾科、棘臀魚科等多種魚類感染發(fā)病（Jack?S?W,?Taylor?P?W,?Crosby?M?D,?et?al.?Summary?of?bacterial?isolates?from?farm-reared?channel?catfish?(1979~1988)?[J].?Vet?Diagn?Invest,?1992,?4:?193～195.），其中最常見的就是魚類爛鰓病(gill-rotdisease)，表現(xiàn)為鰓絲腐爛帶污泥，嚴重時鰓絲軟骨外露，鰓蓋內(nèi)表皮被腐蝕，形成一個透明“小窗”(俗稱開天窗)，其傳染迅速，病程長，一經(jīng)發(fā)病難控制其蔓延（Ordal?E?J,?Rucker?R?R.?Pathogenic?myxobacteria[J].?Proc?Soc?Exp?Biol?Med,?1944,?56:15-18.）。全球每年由于感染柱狀黃桿菌引起魚類發(fā)病死亡所造成的經(jīng)濟損失極其嚴重。而幾乎所有的淡水魚類均對該菌敏感，自然和養(yǎng)殖條件下的海水魚類以及觀賞魚類也可感染發(fā)病（Skrodenyte-arbaciauskiene?V,?Kazlauskiene?N,?Jankauskiene?R.?Evaluation?of?quantitative?composition?of?Flavobacterium?columnare?at?the?Zeimena?salmon?hatchery[J].?Acta?Zool?Lit,?2006,?16(4):?304～308.）。

目前國內(nèi)外尚缺乏對柱狀黃桿菌的快速檢測及預(yù)防措施，主要原因是受到需要特異性抗體的限制。因此，研制出高效價、高蛋白含量、特異性好的柱狀黃桿菌多克隆抗體將為今后柱狀黃桿菌的快速檢測及病害防控提供重要的技術(shù)支持，并且對改善食品質(zhì)量與安全，提高我國國民健康水平，起到不容忽視的作用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的是利用免疫學原理，提供一種柱狀黃桿菌多克隆抗體的制備方法。

本發(fā)明包括如下步驟：

a、采用甲醛滅活的方法制備病原菌顆粒性抗原；

b、取a作為抗原，與弗氏完全佐劑等體積混合，免疫健康白兔；