[發明專利]一種具有高效解磷作用的枯草芽孢桿菌及其應用

有效

• 申請號: 201310474439.3
• 申請日: 2013-10-12
• 公開（公告）號: CN103773709A
• 公開（公告）日: 2014-05-07
• 發明（設計）人: 時翠平;霍靜倩;趙斌;齊萌;張金林;董金皋
• 申請（專利權）人: 河北農業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/125
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及微生物和生物肥料領域，特別是涉及枯草芽孢桿菌，具體而言，本發明涉及一種高效解磷作用的枯草芽孢桿菌及其應用。?

背景技術

磷肥能夠促進植物花芽分化，提早開花結果，促進幼苗根系生長和改善果實品質。施磷能夠促進各種代謝正常進行，植物生長發育良好，同時提高植物的抗寒性和抗旱性。由于磷與糖類、蛋白質和脂肪的代謝和三者相互轉變都有關系，多以不論栽培糧食作物、豆類作物和油類作物都需要磷肥。缺磷時，蛋白質合成受阻，新的細胞質和細胞核形成較少，影響細胞分裂，生長緩慢，也少，分枝或分蘗減少，植株矮小，葉片暗綠，可能是細胞生長慢，葉綠素含量相對提高。某些植物葉子有時呈紅色或紫色。因為缺磷阻礙了糖分運輸，也自己累了大量的糖分，有利于黃色素苷的形成。缺磷時，開花期和成熟期都延遲，產量降低，抗性減弱。但我國有74％的耕地土壤缺磷，土壤中95％以上的磷為無效形式，植物很難直接吸收利用，此外，大量使用化肥明顯造成土壤板結、土壤保水力下降、草地退化、荒漠化嚴重等不良后果。因此，提高磷的利用率一直是農學、土壤學、生態環境和微生物學研究者關注的熱點。?

人們在20世紀初開始注意到微生物與土壤磷之間的關系。Sackett（1908年）發現一些難溶性的復合物施入土壤中，可以被作為磷源而應用，他們從土壤中篩選出50株細菌，其中36株在平板上形成了肉眼可見的溶磷圈。1948年Gerretsen發現植物施入不溶性的磷肥，經接種土壤微生物后，促進了植株的生長，增加磷的吸收。他分離出了這些微生物，發現這些微生物可幫助磷礦粉的溶解。從此，許多科學家致力于解磷菌的研究，相繼報道了許多微生物具有解磷作用。?

本申請發明人經過多年悉心研究，從植物根際土壤中分離到一株新的枯草芽孢桿菌菌株，該菌株具有較強的解磷作用，能把無效的磷有效的轉變成可用磷。?

發明內容

本發明的目的在于提供一種新的枯草芽孢桿菌的菌株，所述菌株具有較好的解磷作用。?

?本發明所述的枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)已經于2013年9月24日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏單位地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號，保藏編號為CGMCC?No.8241。?

進一步地，本發明提供上述枯草芽孢桿菌在解磷方面的用途。

進一步地，本發明的枯草芽孢桿菌可以制成微生物菌劑，即將所述菌株在LB培養液中培養，培養溫度為27?℃，培養天數為5天，轉速為200?rpm，培養液過濾后，將菌液細胞數調節為10⁹個/mL，即制得本發明的枯草芽孢桿菌微生物菌劑。?

本發明所提供的枯草芽孢桿菌是從植物根際土壤中分離得到的，其實驗室命名為菌株Fdp6。?

菌株Fdp6在LB固體培養基（培養基組成為：胰蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，氯化鈉10g/L，瓊脂15g/L）上菌落呈圓形，邊緣不整齊，乳白色，不透明，表面粗糙有褶皺，無光澤。培養至30h，菌體均以休眠體芽孢的形式存在。菌落呈淺黃色。顯微觀察菌體為單細胞，桿狀，單生或雙生，有時成鏈狀。革蘭氏染色陽性，芽孢橢圓形。VP反應、淀粉水解試驗、硝酸鹽還原反應、檸檬酸鹽利用、明膠液化均為陽性；苯丙酸脫氨酶試驗、M.R.、尿酶試驗、丙酸鹽的利用均為陰性，可以在含6.5%?NaCl的LB培養基中生長。利用16S?rDNA基因特異引物對16S?rDNA進行擴增，將擴增產物回收并測序，將測序結果進行Blast分析，結果發現與菌株Fdp6高度同源的菌株均是芽孢桿菌，同源性98%以上，并結合生理生化特征，鑒定其為枯草芽孢桿菌。?

本發明的效果?

在平板法中，即將解磷菌在含有難溶性磷酸鹽或有機磷的固體培養基上培養，菌落周圍產生較大的溶磷圈，本發明的枯草芽孢桿菌經磷鉬藍分光光度法測得其解磷效果為400.236?mg/L，說明本發明菌株具有較強的解磷作用。

具體實施方式

本發明公開了一種高效解磷菌枯草芽孢桿菌，本領域技術人員可以借鑒本文內容，適當改進工藝參數來實現。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領域技術人員來說是顯而易見的，這些都被視為包括在被發明內。本發明所述的枯草芽孢桿菌已經通過較規范的實施例進行了描述，相關人員明顯能在不擺脫本發明內容、精神和范圍內對本文所述的方法和應用進行改動和適當的變更與組合，來實現和應用本發明技術。?

下面結合實施例，進一步闡述本發明。?

實施例1?微生物從土樣中的分離