[發明專利]單性血吸蟲的用途

在審

• 申請號: 201310472736.4
• 申請日: 2013-09-16
• 公開（公告）號: CN104436179A
• 公開（公告）日: 2015-03-25
• 發明（設計）人: 金亞美;喬洪賓;曹宇凡;劉金明;林矯矯
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院上海獸醫研究所
• 主分類號: A61K39/002
• 分類號: A61K39/002;A61P33/12
• 代理公司: 上海序倫律師事務所 31276
• 代理人: 周東萍

技術領域

本發明涉及生物工程技術領域，尤其涉及一種單性血吸蟲的用途。

背景技術

血吸蟲病是一種人和動物都會感染的寄生蟲病，流行范圍廣，對人和家畜均產生嚴重的危害。雖然我國在血吸蟲病的防治上已經取得了巨大成就，但是由于中間宿主釘螺難以消滅及血吸蟲重復感染現象嚴重，全面控制血吸蟲病傳播的前景仍不容樂觀。吡喹酮作為治療血吸蟲病的藥物，以其高效、低毒、使用方便、價格低廉等優點在血吸蟲病臨床治療和防治工作中得到廣泛應用，但是吡喹酮不能預防血吸蟲的重復感染，而且，近年來在曼氏血吸蟲上已經有了吡喹酮抗性蟲株的報道，耐藥蟲株的出現引起了人們的不安與高度關注。因此，迫切需要研制抗血吸蟲高效疫苗。

發明內容

本發明要解決目前缺乏抗血吸蟲高效疫苗的技術問題，提供一種單性血吸蟲的用途，用于制備預防血吸蟲病的疫苗。

此外，還需要提供一種單性血吸蟲的用途，用于制備阻斷血吸蟲病傳播的疫苗。

為了解決上述技術問題，本發明通過如下技術方案實現:

在本發明的一個方面，提供了一種單性血吸蟲的用途，用于制備預防血吸蟲病的疫苗。

在本發明的另一方面，還提供了一種單性血吸蟲的用途，用于制備阻斷血吸蟲病傳播的疫苗。

所述單性血吸蟲為雌性或雄性血吸蟲。優選的，所述單性血吸蟲為雌性或雄性血吸蟲尾蚴。

在本發明的另一方面，還提供了一種抗血吸蟲疫苗，包含雌性或雄性血吸蟲。優選的，所述抗血吸蟲疫苗包含雌性或雄性血吸蟲尾蚴。

在本發明的另一方面，還提供了一種上述抗血吸蟲疫苗的制備方法，包括以下步驟：

將自然感染釘螺溢出尾蚴，通過PCR鑒定及感染小鼠確定其溢出尾蚴為單性。

小鼠免疫性保護實驗證明，用本發明的單性血吸蟲免疫小鼠，能使免疫組小鼠的肝臟蟲卵孵化率降低達到85.6%以上，且顯著減輕小鼠的肝臟病變，說明用本發明的單性血吸蟲免疫動物不僅能顯著減輕宿主病理變化，且能有效阻斷血吸蟲的傳播，本發明的單性血吸蟲具有發展為抗血吸蟲病候選疫苗的潛力，具有很好的應用價值。

附圖說明

下面結合附圖和具體實施方式對本發明作進一步詳細的說明。

圖1是本發明實施例1的PCR鑒定結果圖；

圖2是本發明實施例2的小鼠肝臟病變圖。

具體實施方式

下列實施例中，未注明具體條件的實驗方法，通常按常規條件，如《精編分子生物學實驗指南》(F.M.奧斯伯,R.E.金斯頓,J.G.塞德曼等主編，馬學軍,舒躍龍的譯.北京：科學出版社，2004)中所述的方法進行。

本發明通過對BalB/C小鼠進行血吸蟲單性免疫，然后進行血吸蟲正常感染，發現接受血吸蟲單性免疫的小鼠肝臟未發生任何病變，且蟲卵孵化能力顯著降低。

本發明中，單性感染的血吸蟲在宿主體內不能發育成熟，停留在童蟲階段，因此不會對宿主造成病理損傷。本發明的單性血吸蟲類似于致弱疫苗，能夠在動物中誘導出高保護力，對于血吸蟲單性帶蟲免疫具有十分重要的意義。

實施例1血吸蟲尾蚴的性別檢測

將自然感染釘螺溢出尾蚴進行PCR鑒定、再感染小鼠確定其溢出尾蚴為單性。具體步驟如下：

每只自然感染釘螺單獨置于一個盛滿去氯水的試管中，其他條件與常規溢尾蚴法一致（保持光照，溫度控制在25℃～30℃，加鋼絲網罩）。

用接種環挑取尾蚴，將尾蚴放到含有10ul去離子水的1.5mlEP管中。每個EP管中加入1-2ul的20mg/ml蛋白酶K，在恒溫水浴鍋中進行孵育，溫度為55℃，時間為15min。消化完畢后從EP管中取出5ul，作為蟲體模版，用上游引物：5-ACGT?TAGA?TACT?GCTG?TTCA-3（SEQ?ID?NO.1），下游引物：5-ATAT?TGTT?CCAA?GTAC?GCAT–3（SEQ?ID?NO.2）進行PCR擴增。擴增程序：94℃預變性5分鐘；94℃變性1分鐘,52℃退火30秒,72℃延伸1分鐘,35個循環；72℃后延伸5min。PCR產物在1.0%瓊脂糖凝膠中電泳，紫外透射儀下觀察結果，結果如圖1所示，日本血吸蟲雌蟲樣品會擴增出約150bp的特異性條帶，且擴增的條帶清晰，而雄蟲沒有該擴增條帶。圖1中，M:Marker；1:日本血吸蟲雄蟲；2：日本血吸蟲雌蟲。再進一步將PCR鑒定過的釘螺逸出尾蚴去感染小鼠，在尾蚴感染25天后剖殺小鼠，確定感染尾蚴性別，以此來確定釘螺逸出尾蚴性別。

實施例2動物免疫保護實驗

1.方法