[發明專利]一種I型USHER綜合征相關基因突變及應用此突變基因的耳聾分子病因學診斷試劑

有效

• 申請號: 201310472734.5
• 申請日: 2013-10-12
• 公開（公告）號: CN103710340A
• 公開（公告）日: 2014-04-09
• 發明（設計）人: 高雪;戴樸
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍總醫院
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
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技術領域

本發明涉及一種基因突變及應用此突變基因的診斷試劑，具體涉及一種I型USHER綜合征相關基因突變及應用此突變基因的耳聾分子病因學診斷試劑。?

背景技術

USHER綜合征又稱遺傳性視網膜色素變性-感音神經性耳聾綜合征。據統計，先天性重度-極重度感音神經性耳聾患者中約有10％為USHER綜合征。臨床上將USHER綜合征分為3型，I型為先天性重度-極重度耳聾，伴前庭反射消失，10歲左右出現視網膜色素變性，為三種類型中最重的一型。由于該類患者出生后只表現為聾啞，10歲之后才出現視力障礙，因此單純依靠臨床聽力檢查極易漏診。如能早期篩查出USHER綜合征患者，并在視力障礙出現前進行人工耳蝸植入，則可以有效避免嚴重視力-聽力-言語聯合殘疾的發生。?

以往由于人們缺乏對USHER綜合征遺傳病因學的深入認識以及診斷技術，大部分病例均無法明確分子病因，更無法預防其發生。近30年來，伴隨耳聾遺傳病因學及分子生物學技術的快速發展，至今已有5個I型USHER綜合征基因被克隆，豐富了USHER綜合征基因譜。但在我國，盡管有眾多的USHER綜合征患者，其分子病因多不清楚，難以明確診斷，使得USHER綜合征防治極其困難。?

研究證實MYO7A基因突變可以引起I型USHER綜合征及常染色體隱性遺傳性耳聾[1，2]，是最常見的I型USHER綜合征致病基因，臨床上約50％的I型USHER綜合征患者均由該基因突變引起。MYO7A基因位于11號染色體長臂，包含49個外顯子，編碼2215個氨基酸，基因較大，傳統的PCR、測序檢測法?耗時、耗力，因此在臨床上很難常規檢查。如能明確MYO7A基因的致病突變位點，設計針對致病突變位點的檢測芯片，則有望解決臨床上I型USHER綜合征患者基因篩查、診斷的難題。?

已有文獻報道MYO7A基因編碼DNA的第73位堿基---鳥嘌呤替換為腺嘌呤引起編碼氨基酸的第25位甘氨酸突變為精氨酸(c.73G＞A，p.G25R)，為一種I型USHER綜合征相關基因突變，但只有2條等位基因同時攜帶該突變才致病，如果1條基因攜帶該突變不致病，此發現不足以解決臨床上I型USHER綜合征患者基因篩查、診斷的難題。尋找新的致病突變，豐富I型USHER綜合征基因譜及突變譜將為臨床上方便快捷的篩查和診斷I型USHER綜合征患者提供重要的靶點及理論依據，是本領域研究工作者孜孜不倦的探究領域。?

發明目的?

有鑒于此，為了解決現有技術中的難題，本發明人經過艱辛的研究，發現了另一種I型USHER綜合征相關基因突變，該突變與已知的73位堿基相關基因突變結合篩查，可有效解決上述難題。?

本發明還提供應用上述新發現的I型USHER綜合征相關突變與已知相關突變結合的在臨床上可有效快捷地篩查、診斷I型USHER綜合征的分子病因學診斷試劑。?

本發明提供的一種I型USHER綜合征相關基因突變，所述突變為MYO7A基因編碼DNA的第462位堿基胞嘧啶替換為腺嘌呤引起編碼氨基酸的第154位半胱氨酸突變為終止碼(c.462C＞A，p.C154X)。?

本發明提供的一種含有上述I型USHER綜合征相關突變基因的耳聾分子病因學診斷試劑，所述診斷試劑包括，1)DNA提取體系試劑盒：被測個體外周靜脈血基因組DNA提??；2)PCR擴增體系試劑盒和3)DNA測序體系，所述PCR擴增體系：以外周靜脈血提取的基因組DNA為模板，以(a)和(b)兩組引物同時進行?PCR擴增，?

具中：(a)組引物為上游引物(5’→3’)：TTGTAGCAGAGGGATATAGGGC，下游引物(5’→3’)：GGGGACTACTCACATTGTCTTCA，?

(b)組引物為上游引物(5’→3’)：CTGGTGGCTGTGAACCCCTA，下游引物(5’→3’)：GCTTGATGGCATTTCCGAC；?

所述DNA測序體系：將PCR擴增產物直接進行DNA測序，并與原MYO7A基因編碼DNA序列對比：?

當擴增產物中c.73G＞A和c.462C＞A突變均存在時，為I型USHER綜合征患者，當存在突變之一時，為I型USHER綜合征攜帶者，當兩突變均不存在時，為健康個體。?

MYO7A蛋白為非常規肌球蛋白，在耳蝸毛細胞靜纖毛的形成中發揮了重要作用。?