[發明專利]一種用于治療禽類病毒性疾病的復方注射液及其制備方法

在審

• 申請號: 201310462847.7
• 申請日: 2013-09-30
• 公開（公告）號: CN104208662A
• 公開（公告）日: 2014-12-17
• 發明（設計）人: 范超杰;李建正;陳建暉
• 申請（專利權）人: 鄭州后羿制藥有限公司
• 主分類號: A61K38/21
• 分類號: A61K38/21;A61K9/08;C07K14/56;C07K1/14;A61P31/14;A61P31/20;A61P31/22;A61P35/00;A61K36/481
• 代理公司: 鄭州睿信知識產權代理有限公司 41119
• 代理人: 牛愛周

技術領域

本發明屬于獸用注射液技術用于，具體涉及一種用于治療禽類病毒性疾病的復方注射液，同時還涉及一種用于治療禽類病毒性疾病的復方注射液的制備方法。

背景技術

近年來，傳染病的發生與流行已成為阻礙我國畜牧業快速發展的重要因素，而禽類病毒性疾病是制約家禽養殖業發展的重要因素之一，給養禽業造成巨大經濟損失，如禽流感、新城疫等。盡管多數病毒性疾病可用疫苗免疫預防，但效果不甚理想，家禽生產中因漏免或免疫失敗導致疫情爆發情況時有發生。目前國內外應用于禽類病毒性疾病的化學藥物主要是金剛烷胺和利巴韋林制劑，臨床療效不確切，而且存在如藥物殘留、影響蛋禽產蛋率恢復等毒副作用。治療手段和方法的缺乏、化學藥物殘留較為嚴重以及人類對畜禽產品食用安全的高度關注，使得療效優良、無毒副作用、無殘留、綠色環保的獸用抗病毒藥物的研發備受關注。

生物制品-基因工程禽α干擾素注射液是無毒、無害、無殘留的生物制品，對抑制病毒的復制和提高機體免疫力方面有一定的功效；但是干擾素不直接殺傷或抑制病毒，而是在細胞感染病毒后，與未感染的細胞上的相關受體作用，使這些細胞合成抗病毒蛋白，防治進一步感染，從而起到抗病毒的作用，但干擾素對已感染的細胞沒有幫助，并且其必須再局部細胞中達到較高的濃度才能誘導宿主細胞合成抗病毒蛋白。因此，現有的禽α干擾素注射液普遍存在起效慢、療效有限的問題，還不能滿足使用的需求。

發明內容

本發明的目的是提供一種用于治療禽類病毒性疾病的復方注射液，解決現有禽α干擾素注射液存在的起效慢、療效有限的問題。

本發明的第二個目的是提供一種用于治療禽類病毒性疾病的復方注射液的制備方法。

為了實現以上目的，本發明所采用的技術方案是：一種用于治療禽類病毒性疾病的復方注射液，包括以下重量份數的原料：黃芪提取液2～4份、雞α-干擾素注射液6～8份。

所述黃芪提取液是由以下方法制備的：

1）將黃芪粉碎至顆粒粒徑為250～300μm，按照黃芪與水的質量比為1:6～10的比例將黃芪浸于蒸餾水中，在60～75℃條件下進行恒溫微波提取，得混合物A；

2）將混合物A進行離心分離，取上清液，用活性炭進行脫色，得混合物B；

3）將混合物B濃縮至比重為1.15～1.25，得混合物C；

4）向混合物C中加入6～8倍體積量的乙醇溶液，攪拌使其混合均勻后，進行離心分離，取沉淀物并用蒸餾水稀釋至比重為1.05～1.15，得混合物D；

5）將混合物D進行凝膠層析，收集吸收峰為280nm的層析后洗脫液，即得黃芪提取液。

步驟1）中所述微波提取的功率為250W，重復提取3～4次，每次提取時間為11～15min。

步驟2）中所述離心分離的轉速為3000～5000rpm，時間為12～16min；步驟4）中所述離心分離的轉速為3000～5000rpm，時間為12～16min。

步驟4）中所述乙醇溶液中乙醇的質量分數為70%～95%。

步驟5）中所述凝膠層析所用凝膠為葡聚糖凝膠，層析柱的內徑與高度比為1:30～50；所述凝膠層析的洗脫液為蒸餾水，流速為0.3～0.6ml/min。

本發明的用于治療禽類病毒性疾病的復方注射液，所述雞α-干擾素注射液可為市售雞α-干擾素注射液產品，或通過以下方法制備。

所述雞α-干擾素注射液是由以下方法制備的：

a.取含有重組雞α-干擾素蛋白的菌液，離心收集菌體，用PBS緩沖液洗滌后，再用PBS緩沖液重懸，超聲使菌體破壁后，離心并收集沉淀物；

b.將步驟a所得沉淀物用PBS緩沖液洗滌后，用變性緩沖液溶解包涵體，離心收集上清液，得變性蛋白溶液；

c.將步驟b所得變性蛋白溶液加入復性緩沖液中，4℃靜置48h后，離心收集上清液，得含有重組雞α-干擾素蛋白的溶液；

d.從重組雞α-干擾素蛋白的溶液中收集重組雞α-干擾素蛋白，進行蛋白處理后，加入保護劑溶液進行混合，使重組雞α-干擾素的含量為10⁸～10⁹IU/100ml，即得雞α-干擾素注射液；所述保護劑溶液可為所有可用于制備雞α-干擾素注射液的添加劑組合溶液；