[發明專利]免疫學化驗系統和方法

有效

• 申請號: 201310462028.2
• 申請日: 2004-06-24
• 公開（公告）號: CN103599817A
• 公開（公告）日: 2014-02-26
• 發明（設計）人: 約翰·D·羅巴克;克里斯托弗·D·希利爾
• 申請（專利權）人: 愛莫里大學
• 主分類號: B01L3/00
• 分類號: B01L3/00;G01N35/02
• 代理公司: 北京明和龍知識產權代理有限公司 11281
• 代理人: 郁玉成

本申請是申請人為“愛莫里大學”、申請日為“2004年6月24日”、申請號為“200480021043.2”、發明名稱為“免疫學化驗系統和方法”的中國發明專利申請的分案申請。

優先權要求

本申請要求同樣未決的美國實用專利申請為優先權，所述實用專利申請于2003年6月24日提交，其名稱為“免疫學化驗系統及方法（Immunological?Assay?System?and?Method）”，序列號為10/602,981，并在此將其整體結合作為參考。

技術領域

本發明總體涉及一種免疫學化驗系統，更特別地，涉及一種用于分離和分析免疫學和免疫血液學標本成分的系統和方法。

背景技術

免疫學化驗設計用于檢測抗體和抗原之間的反應。這些化驗通常采用細胞，例如作為“抗原載體”的紅血球（RBCs）或者小球（bead）。在適當的化驗構造中，抗體可以交叉連接抗原載體，從最初單獨的抗原載體和抗體而聚集產生大的三維抗原抗體。在其他構造中，抗體結合在抗原載體上而不與它們交叉連接。

在血庫設定中，免疫血液學測試使用RBCs和抗體以確定輸血捐贈者和接受者在輸血之前的可配伍性。例如，如果接受者的抗體與捐贈者的RBCs產生交叉連接，捐贈者和接受者是不配伍的，結果會形成大的RBC聚集。現在商業上可用的測試試劑是設計用來區分這些聚集和單獨的、非凝集的RBCs。例如在標準的“試管測試”中，RBCs與抗體混合，在大約1000X重力加速度（g）下離心分離很短的時間，大約30秒，以增強形成的抗原抗體復合體，然后用手輕輕地再次懸掛，從而可將凝集的RBCs從非凝集的RBCs中區別出來。試管測試要使用大量的勞動力，不能自動化，由于要依賴各個操作者的技巧，各個實驗室的結果難以實現標準化。

一種可選的用于鑒別凝聚RBCs的近似法是自旋柱技術（column?technology），它基于標準的色譜分析原理。有了這種方法，利用充滿諸如小球、凝膠、或者聚丙烯酰胺的均質基體試管，便可分離聚集的和獨立的RBCs。基體材料設計有特定大小的洞或微孔，從而在仔細控制的離心力作用下，大的（“4＋”）聚集幾乎不能進入基體。然而，較小的聚集（“3＋”到“1＋”）依次進入基體增加等級，而未凝聚的RBCs不僅進入基體，而且完全沉積在試管底部。為了讓單一均質色譜分析基體有效地將獨立的RBC從不同尺寸的RBC聚集中分離出來，必須在精控制80Xg低速離心條件下，進行相對較長運行時間的離心分離，大約10分鐘。與最佳離心分離狀況的偏差，例如為縮短化驗運行時間而采用較高的離心分離速度，，會導致RBCs的不良分離，損害確定血液捐贈者和接受者之間可配伍性的化驗能力。這種方法在一定范圍內可以自動化，較少地依賴于操作者的技術。

由于處理柱的生產成本，自旋柱技術相比試管測試昂貴許多。基體材料為溶液，典型地必須要有精控的包裝、運輸、和存儲條件。另外，離心分離步驟的延長，其測試要比試管測試慢了，大約10分鐘，而試管測試為大約30秒。解釋化驗的結果也需要對操作者進行培訓，因為讀出的是“模擬”刻度，即典型地必須估算RBC遷移通過基體的距離。

這種技術在免疫血液學測試中主要有三種應用：正向血型測定、逆向血型測定、以及抗體篩選。每一種都將單獨討論。

ABO/D正向測定（ABO/D?Forward?Typing）

正向測定用來檢測在RBC表面上是否存在特殊的臨床上重要的抗原。這些包括，但是不限于A－抗原、B－抗原，Rh（D）－抗原，以及其它包括Kell、Duffy等的RBC抗原。通常，測試各種這些抗原用在單獨的測試/反應中。因此，需要三個單獨的反應識別這三種RBC抗原。這種規程通常需要設立三個單獨的試管/反應檢測RBCs上是否存在A、B和Rh（D）抗原。

對于A和B抗原測定，我們現在主要使用老鼠抗體直接接觸適合的抗原，盡管也可以使用人類的抗血清。理論上，如果檢測設備，即流動血細胞計數器或其他適合的儀器，可以檢測的話，則這些抗體可以用例如熒光或其它多種商業上可用的熒光染料直接標記。A和B抗原包括部分糖殘余，然而準備來接觸這些抗原的大多抗體是免疫球蛋白M（IgM）類的，因而難以直接標記。