[發(fā)明專利]一種腰椎間盤退變相關(guān)SNP的檢測試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310456540.6
• 申請日: 2013-09-30
• 公開（公告）號: CN103468822A
• 公開（公告）日: 2013-12-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 吳南;邱貴興;吳志宏;陳俊;劉森;劉嘉琦;蘇新林;趙珞
• 申請（專利權(quán)）人: 吳南
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11;G01N21/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明涉及一種SNP檢測試劑盒。具體而言，本發(fā)明涉一種檢測腰椎間盤退變相關(guān)SNP的檢測試劑盒。

背景技術(shù)

腰背部疼痛是臨床上的常見疾病和多發(fā)病，主要癥狀是后背的腰骶部的疼痛或不適感，可伴有或不伴有下肢的放射痛，是引起失能最常見原因。在一生中，約80％人群飽受腰背部疼痛的困擾，嚴重影響了他們的日常工作和生活。其中腰椎間盤退變(lumbar?disc?degeneration，LDD)為誘因的約占下腰痛的50％，是引起腰背部疼痛的主要原因之一。雖然LDD疾病的發(fā)生是遺傳和環(huán)境因素的共同作用，但具有很大程度的遺傳易感性，可能與人群中存在的基因單核酸多態(tài)性(single?nucleotide?polymorphism，SNP)有關(guān)[Valdes?A?M，Hassett?G，Hart?D?J，et?al.Radiographic?progression?of?lumbar?spine?disc?degeneration?is?influenced?by?variation?at?inflammatory?genes：a?candidate?SNP?association?study?in?the?Chingford?cohort[J].Spine，2005，30(21)：2445-2451.]。SNP分布廣泛，數(shù)量多而且相對穩(wěn)定地存在于人類染色體上。ADAMTS5基因單核苷酸多態(tài)性在腰椎間盤退變性疾病的發(fā)生中扮演著非常重要的角色，因而有必要對潛在的發(fā)病群體進行篩選，以進一步闡明ADAMTS5基因單核苷酸多態(tài)性(SNP)與腰椎間盤退變關(guān)系，為預(yù)防和診斷疾病提供指導(dǎo)。

基因診斷技術(shù)的出現(xiàn)，改變了過去臨床上僅依靠相關(guān)臨床特征為判斷依據(jù)，有利于疾病的提前預(yù)防和確診。由于腰椎間盤退變是骨科的常見病及多發(fā)病之一，其病因復(fù)雜，到目前為止還沒有診斷腰痛的公認標準，因此對根據(jù)相關(guān)基因變異，進行分子檢測是預(yù)防和診斷該病的有效措施。可以作為一個潛在的定量檢測和敏感的標記物評估早期腰椎間盤退變的方法。研究表明早期腰椎間盤退變時采用干細胞再生移植，將會是治療椎間盤退變的最有效的手段，從而緩解腰背部疼痛，因此對腰椎間盤退變的早期診斷和評價十分重要。

發(fā)明內(nèi)容：

為了能夠檢測出整個社會人群中易患LDD的群體，為易感人群做出預(yù)警，盡早采取應(yīng)對措施，避免LDD的發(fā)生，本發(fā)明公開了一種可以檢測與腰椎間盤退變相關(guān)的SNP熒光定量PCR試劑盒。

本發(fā)明通過檢測489例腰椎間盤退變患者和558份正常人的ADAMTS基因在病例及對照(case-control)中的分布研究，結(jié)果顯示ADAMTS的3個SNP位點：rs151058(SNP10)，rs229052(SNP11)，rs162502(SNP18)與腰椎間盤退變具有高度相關(guān)性。在LDD人群中ADAMTS-5的rs151058(SNP10)處由A突變成G，rs229052(SNP11)處由A突變成G，或rs162502(SNP18)處由G突變成A，而正常人非常小的概率在上述位點發(fā)生上述的突變。

本發(fā)明根據(jù)基因ADAMTS-5的SNP10、SNP11、SNP18三個突變位點區(qū)域的DNA序列設(shè)計并合成3對引物和位于正反引物之間的熒光探針，所述的熒光探針包括陽性探針和陰性探針，各自標記不同的熒光，陽性探針與突變的DNA鏈雜交，陰性探針與正常DNA鏈雜交。上述探針在設(shè)計時盡量使不同探針的Tm值盡量位于(45±5)℃，使探針長度位于14-20bp，使每對探針所檢測的基因位點位于探針序列中部或中部附近，使探針與相應(yīng)單鏈靶基因的結(jié)合部位盡量靠近單鏈靶基因的5’端至中部區(qū)域之間以保障雜交效率。探針的5’端有氨基修飾基團，以便與醛基修飾芯片相結(jié)合：不同探針的綜合參數(shù)(探針長度、GC％及Tm值)盡量接近，為了減少雜交時的空間位阻。