[發明專利]一種腰椎間盤退變相關SNP的檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201310456540.6
• 申請日: 2013-09-30
• 公開（公告）號: CN103468822A
• 公開（公告）日: 2013-12-25
• 發明（設計）人: 吳南;邱貴興;吳志宏;陳俊;劉森;劉嘉琦;蘇新林;趙珞
• 申請（專利權）人: 吳南
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11;G01N21/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種SNP位點在制備檢測腰椎間盤退變試劑盒中的應用，其特征在于，所述SNP位點為以下位點的一個或多個，其在GeneBank中的編號分別為：rs151058、rs229052、rs162502。

2.一種檢測ADAMTS-5基因SNP位點突變的特異性引物及特異性探針，其特征在于，所述的特異性物及特異性探針為3組，其中每組特異性引物包括上游引物和下游引物，特異性探針包括陽性探針和陰性探針；

其中第一組特異性引物及特異性探針分別為上游引物1其序列如序列表SEQ?ID?NO.1所示，下游引物2其序列如序列表SEQ?ID?NO.2所示，陽性特異性熒光探針3，其序列如序列表SEQ?ID?NO.3所示，陰性特異性熒光探針4，其序列如序列表SEQ?ID?NO.4所示；

其中第二組特異性物及特異性探針分別為上游引物5其序列如序列表SEQ?ID?NO.5所示，下游引物6其序列如序列表SEQ?ID?NO.6所示，陽性特異性熒光探針7，其序列如序列表SEQ?ID?NO.7所示，陰性特異性熒光探針8，其序列如序列表SEQ?ID?NO.8所示；

其中第三組特異性物及特異性探針分別為上游引物9其序列如序列表SEQ?ID?NO.9所示，下游引物10其序列如序列表SEQ?ID?NO.10所示，陽性特異性熒光探針11，其序列如序列表SEQ?ID?NO.11所示，陰性特異性熒光探針12，其序列如序列表SEQ?ID?NO.12所示。

3.根據權利要求2所述的檢測ADAMTS-5基因SNP位點突變的特異性引物及特異性探針，其特征在于，所述的陽性探針5’端標記VIC熒光，陰性探針5’端標記FAM熒光，陽性探針3’端和陰性探針3’端標有熒光淬滅基團BHQ-1；或者陰性探針5’端標記VIC熒光，陽性探針5’端標記FAM熒光，陽性探針3’端和陰性探針3’端標有熒光淬滅基團BHQ-1。

4.權利要求2或3中任意一項所述的檢測ADAMTS-5基因SNP位點突變的特異性引物及特異性探針，在制備檢測腰椎間盤退變試劑盒中的用途。

5.一種檢測腰椎間盤退變的熒光定量PCR試劑盒，其特征在于，所述試劑盒含有權利要求2所述的任意一組特異性物及特異性探針或其特異性物及特異性探針的組合。

6.根據權利要求5所述的一種檢測腰椎間盤退變的熒光定量PCR試劑盒，還包括：熒光定量PCR?mix；含ADAMTS-5基因rs151058位點、rs162502位點和rs229052的突變和未突變的DNA標準品。

7.一種檢測ADAMTS-5基因rs151058位點、rs229052位點和/或rs162502位點的方法，具體包括以下步驟：

A)對基因組DNA待測樣品在相同反應條件下分別加入陽性或陰性探針進行PCR擴增，監測反應體系中熒光信號的變化。

B)根據濃度已知的標準樣品繪制標準曲線，其中橫坐標表示起始拷貝數的對數，縱坐標表示Ct值，Ct值為每個反應中的熒光信號到達預設域值時經歷的循環數，根據標準曲線與待測樣本的曲線進行模板初濃度的測定。

C)根據標準曲線求取不同探針顯示的DNA初始反應拷貝數，求取每個探針的至少三個反應所得拷貝數的平均值，確定突變比例，該突變比例為陽性探針熒光顯示的拷貝數與兩種探針熒光顯示的拷貝數之和的比值；不同濃度的樣品測得的拷貝數不同，而同一樣品的突變比例是不變的，由此可確證樣本待檢測位點是否發生了突變。

8.ADAMTS-5基因rs151058位點、rs229052位點和rs162502位點在制備檢測或治療腰椎間盤退變試劑中的用途。